大蒜素抗结核的免疫学研究.docVIP

精品论文 参考文献 大蒜素抗结核的免疫学研究 （长春市第二医院药剂科 吉林长春 130000） 　　【摘要】目的：对大蒜素抗结核的免疫学特性进行初探。方法：将BALB/c小鼠随机分为空白组、卡菌苗组、大蒜素低剂量组、大蒜素中剂量组、大蒜素高剂量组，按照规划好的步骤给与生理盐水、卡菌苗及不同浓度的大蒜素肌注，之后评估小鼠脾脏指数和胸腺指数，利用MTT法检测淋巴细胞增殖情况，利用流式细胞仪检测细胞因子及体外大蒜素刺激后T细胞产生IFN-gamma;和IL-4的情况。结果：实验各组小鼠脾脏和胸腺指数无明显差异性（Pgt;0.05）。大蒜素高剂量组与空白组相比淋巴细胞增殖明显增殖，具有显著差异性，Plt;0.05。检测T细分泌IFN-gamma;，IL-4时空白组与卡菌苗组相比有显著差异。体外大蒜素刺激后T细胞后产生IFN-gamma;明显增加而IL-4无显著差异。结论：大蒜素能通过上调IFN-gamma;增强机体抗结核的能力。 　　【关键词】大蒜素；抗结核；IFN-gamma;；IL-4 　　【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）26-0051-03 　　结核一直是长期困扰人类的传染性疾病，上世纪90年代结核虽然得到一定程度的控制，但进年来器官移植后长期服用免疫抑制剂及HIV感染等传染病感染人群的激增，为结核的抬头创造了条件，同时多重耐药的结核分枝杆菌的出现，让这一古老的顽疾再次走进人们的视野。大蒜素是从大蒜当中提取出的一种有机硫化合物，具有抗菌、抗肿瘤、降脂、降压、保护脏器的作用[1-3]。并有学者发现大蒜素与其他抗涝药物联用能够提高痰菌的转阴率[4]，但大蒜素抗结核杆菌的免疫学始终不明确，本文章通过对大蒜素抗结核杆菌的免疫学机制的初探，进一步为大蒜素在临床治疗当中的应用提供依据。 　　1.实验材料 　　1.1 主要实验试剂和药物 　　大蒜素注射液，上海和丰制药有限公司；anti-CD3-APC、anti-CD8-PeCy5.5、anti-IFN-gamma;-FITC、anti-IL-4-PE，天津协科有限公司；无支原体的小牛血清，上海通善生物科技有限公司；小鼠淋巴细胞分离液、RPMI1640，Solarbio科技有限公司；注射用母牛分枝杆菌（微卡），安徽龙科马生物制药有限责任公司；噻唑蓝（MTT），上海华蓝化学科技有限公司。 　　1.2 主要实验仪器 　　酶联免疫检测仪，美国BioTek；低温高速离心机，上海医疗器械股份有限公司；二氧化碳培养箱，日本SANYO；冰箱，中国海尔；恒温水浴锅，杭州大卫科教仪器有限公司；倒置相差显微镜，Olympus公司；全自动灭菌锅，山东新华医疗器械股份有限公司。 　　1.3 实验动物 　　雌性BALB/c小鼠，体重约20g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。 　　2.实验方法 　　2.1 实验分组 　　将雌性BALB/c小鼠随机分为5组，每组6只。（1）空白组：每天肌注0.3ml生理盐水；（2）卡菌苗组：每两周肌注22.5mu;g/0.3ml微卡菌苗1次；其余时间每天肌注生理盐水0.3ml；（3）大蒜素低剂量组：每天肌注浓度为0.04mg/ml的大蒜素0.3ml；（4）大蒜素中剂量组：每天肌注浓度为0.08mg/ml的大蒜素0.3ml；（5）大蒜素高剂量组：每天肌注浓度为0.12mg/ml的大蒜素0.3ml。其余饲养条件相同。共饲养6周，每周称重一次，之后进行摘除眼球采血，放入抗凝管中保存。 　　2.2 大蒜素对于小鼠免疫功能的影响 　　2.2.1脏器指数 　　处死小鼠后在无菌状态下去除脾脏及胸腺，称重后计算脏器指数。 　　脾指数=脾质量（mg）/体重（g） 　　胸腺指数=胸腺质量（mg）/体重（g） 　　2.2.2淋巴细胞增殖实验 　　参考陈丹[5]对淋巴增殖的实验并稍加修改进行脾淋巴细胞的分离计数、脾淋巴细胞培养以及淋巴细胞的增殖实验。 　　2.2.3流式细胞仪检测细胞因子 　　2.2.3.1外周血单核淋巴细胞的分离 　　取3ml保存的各组小鼠的抗凝血与RPMI1640培养液、淋巴细胞分离液按1:1:1混合，之后放入20℃，2000rpm的离心机中离心20min。移液管小心吸取淋巴细胞分离液面上的白色雾状淋巴细胞层，使用无血清的RPMI1640洗三次，第一次为20℃、1800rpm、10min，之后两次为4℃、1500rpm、5min。此时的单核淋巴细胞总数约为3times;106。 　　2.2.3.2淋巴细胞产生细胞因子的刺激培养 　　取1ml保存的各组小鼠的抗凝血加入RPMI1640不完全培养液1ml混匀，加到24孔培养板内分成2个孔进行培养，每孔1ml。