gc-ms单点外标法检测生物检材中的苯巴比妥.docVIP

精品论文 参考文献 GC-MS单点外标法检测生物检材中的苯巴比妥 瞿勇强 解润芳 李桢 李慧方洁 王蕊 （昆明医科大学法医学院 云南昆明650500） 基金项目：云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项资金项目，项目编号（2014FB013） 通讯作者：解润芳（1974—），女，讲师，硕士，研究方向：毒药物分析 [摘要] 目的 建立一种简便、快速、准确、可靠的单点外标法检测生物检材中的苯巴比妥。方法 丙酮：水(v/v 8:2)对生物检材进行浸泡，然后在pH=3~4的条件下，用乙酸乙酯进行提取分离，GC-MS对样品进行检测，用总离子流图（TIC图）中苯巴比妥保留时间及质谱图中苯巴比妥的特征离子碎片定性，以单点外标法进行定量。 结果 该方法简单易操作，背景干扰小，分离效果好，分析速度快。 结论 该方法可用于法医毒物分析生物检材中苯巴比妥的检验，结果令人满意。 [关键词] 法医毒物分析，单点外标法，GC-MS，生物检材 本文基于苯巴比妥的理化性质及参考文献[4-8]的基础上，提出采用GC-MS单点外标法检测生物检材中的苯巴比妥，生物检材经过简单的样品前处理，用GC-MS对样品进行定性定量分析。 1 材料与方法 1.1 主要仪器和试剂 GC/MS：Agilent7890A/ 5975C 气相色谱-质谱联用仪；配有电子轰击离子源( EI )及Nest11.0化学图谱库 苯巴比妥标准溶液（1.0mg/mL，购自司法部司法鉴定科学技术研究所） 甲醇（色谱纯） 二次蒸馏水 1.2溶液配制 苯巴比妥标准工作溶液：准确移取一定量上述苯巴比妥标准溶液置于10 mL容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释至刻度，使其浓度为0.01mg/mL。 待测样品：沙先生心血，沙先生肝脏，沙先生胃及胃内容物 1.3 实验方法 1.3.1 GC/MS仪器条件 离子源：EI源，离子化能量：70eV，离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；色谱柱：HP-5ms 30mtimes;0.25mmtimes;0.25mu;m。进样口温度：280℃；传输线温度：250℃；程序升温：初温80℃保持3min，以30℃/min的速率升温到300℃，保持8min；进样方式：分流进样，分流比：10:1；载气：氦气，纯度：＞99.99%，流速：1.0ml/min。 1.3.2 样品前处理 分别取送检沙先生心血5mL，沙先生肝脏10 g（剪碎），沙先生胃及胃内容物10g（剪碎），置于50mL具塞塑料离心管中，均加入20mL丙酮：水(v/v 8:2)浸泡约30min，然后置于3000r/min离心机离心3min，取出上清液分别放置于三个瓷坩埚中，残渣仍然用20mL丙酮：水浸提二次，并把后二次的上清液合并于同一个瓷坩埚中，把瓷坩埚放在85℃水浴锅上挥干，取下瓷坩埚，冷却至室温。 再用15mLpH=3~4的盐酸水溶液少量多次的洗涤瓷坩埚上的挥干物，并转移至50mL具塞塑料离心管，用50mL乙酸乙酯萃取三次，三次萃取液都置于同一瓷坩埚中，把瓷坩埚放在85℃水浴锅上挥干，取下瓷坩埚，冷却至室温，用色谱纯甲醇少量多次地洗涤瓷坩埚中的物质，并定容在1mL色谱纯甲醇中，置于进样瓶中，分别得到沙先生待测心血，沙先生待测肝脏，沙先生待测胃及胃内容物。 1.3.3分析检测 将空白对照样品（色谱纯甲醇），0.01mg/mL苯巴比妥标准工作液，沙先生待测心血，沙先生待测肝脏，沙先生待测胃及胃内容物，分别进样1mu;L，用GC/MS在1.3.1条件进行分离分析。 2 结果与讨论 2.1对照样品结果及讨论 空白对照样品在TIC中8.385min处未出峰，说明色谱纯甲醇可以作为空白试剂使用，不影响测定，可排除假阳性干扰的可能。在苯巴比妥标准工作液的TIC中，8.385min出现苯巴比妥的色谱峰，而且峰形很好基本成正态分布，说明所建立的分离分析方法适用于苯巴比妥的检测。为苯巴比妥TIC中色谱峰所对应的质谱，MS中显示了苯巴比妥的特征离子碎片为：204及232，与Nest11.0化学谱库中苯巴比妥的匹配度很高＞95%，进一步确证为苯巴比妥，而且GC/MS分离分析方法还给出了苯巴比妥的分子结构，使定性更加准确、可靠。 2.2待测样品结果及讨论 沙先生待测心血的TIC，在TIC中8.385min未出现苯巴比妥的色谱峰，可以得出沙先生待测心血中未检出苯巴比妥的结论。分别为沙先生待测肝脏及沙先生待测胃及胃内容物的TIC及所对应的MS,沙先生待测肝脏在8.472min处出现苯巴比妥的色谱峰，沙先生待测胃及胃内容物在8.46