印度洋鸢乌贼氧化三甲胺脱甲基酶的分离纯化及生化特性的研究 Purification and Characterization of Trimethylamine-N-Oxide Demethylase from Ryukyu squid(Symlectoteuthis oualaniensi).pdfVIP

印度洋鸢乌贼氧化三甲胺脱甲基酶的分离 纯化及生化特性的研究’ 冯 慧1，付雪艳2，薛长湖1，刘鑫1 1(中国海洋大学食品科学与工程学院，山东青岛，266003) 2(HunlanNutritionResearchCenteratTufts s．02111) University，U mmol／L 摘要对印度洋鸢乌贼肌肉中的氧化三甲胺脱甲基酶(TMA0ase)进行了研究。将鸢乌贼肌肉用20 Tris一醋酸缓冲液萃取，经酸、热处理后通过DE52阴离子交换柱层析和SephacrylS--300凝胶柱层析得到纯化 300倍的TMAOase。纯化得到的TMAOase分子质量为18．2ku，最适温度和pH分别为55℃和7．0；而且该酶 在50℃和pH7．0～9．0具有很好的稳定性。TMAOase的活性可被茶多酚、植酸和冰醋酸抑制。此外， TMAOase可以将TMA0等量转化成二甲胺(DMA)和甲醛(FA)，Km为24．7mmol／L。 关键词 印度洋鸢乌贼，氧化三甲胺脱甲基酶(TMAOase)，分离纯化，生化特性 氧化三甲胺脱甲基酶(TMAOase)能催化氧化三外，TMAOase还能引起蛋白的交联，造成蛋白聚集 甲胺(TMAO)分毹成二甲胺(DMA)和甲醛(FA)[1]。而导致蛋白溶解度的下降[3]。鸢乌贼肌肉中含有大 大量的研究表明，TMAOase主要存在于内脏器官和 能在加工或贮藏过程中产生甲醛，但目前还没有关于 血红肉中[1’2]。Benjakul等人研究了TMAOase在 蛇鲻体内各个器官的分布[3]，研究表明，肾脏具有最 鸢乌贼是否含有TMAOase的报道。本文的目的是 纯化鱿鱼肌肉中的TMAOase并对其性质作详细的 高的TMAOase活性，其次是脾、胆囊、肠和肝脏。而 7．0， 研究，以期为合理开发和加工鸢乌贼提供理论依据。 且，从肾脏中提取的TMAOase最高活性为pH 分子质量为128ku。Rehbein等人报道TMAOase 1 材料与方法 主要存在于肾脏和脾脏中，很少在肌肉中[2]。然而在 1．1原料和试剂 对在鳕科鱼类如红长鳍鳕[4一]和狭鳕[6]的研究时发 印度洋鸢乌贼，远洋渔钓冷冻保藏；TMAO购自 现，TMAOase在肌肉中也存在。Kimura等人在对 Fluka，Switzerland；其他试剂均为分析纯。 狭鳕的研究中发现，肌肉中的TMAOase为热稳定蛋 1．2 TMAO嬲e的纯化 白，在80℃加热30min，仍能保持好的活性[7]。还有 1．2．1粗酶液的提取 ～些报道推测，鱿鱼的胴体中含有TMAOase[8’9]。 根据Kimura的方法，并有所改动[7]。取一定量 oualaniensi)又称“南 鸢乌贼(Symlectoteuthis 的冻藏鸢乌贼，去皮，切碎，加5倍原料质量的含1 鱿”，隶属柔鱼科(Ommastrephida)，为经济柔鱼类， NaCl