固相RNase清除剂,介绍及使用说明.docVIP

固相RNase清除剂固相RNase清除剂是开发的特殊的RNase灭活剂。它含有多种成分，能高效灭活固体表面的RNase污染，保障RNA工作环境的清洁。使用广泛，能同时灭活RNase T1、 RNase H、BAL31、S1、Mung bean nuclease等RNase和DNase。其效力和速度远远高于常用的DEPC，无毒，使用简单，处理后不需要高压灭菌。 使用方法： 水的处理直接将固相RNase清除剂原液按1:1000的比例加入到需要处理的水中，混合均匀后室温放置24小时即可直接使用，得到的水可以配制电泳溶液和裂解液。但如果需要溶解RNA，建议使用工作平台的清洁直接将固相RNase清除剂原液或10倍的新鲜稀释液喷于台面，5分钟后用普通吸水纸擦净，最后用沾有固相RNase清除剂1000倍新鲜稀释液的吸水纸擦净，晾干。注意：由于一般的工作平台RNase污染都很严重，最好是使用固相RNase清除剂原液或十倍的新鲜稀释液（稀释液的存放时间不要超过一天），不要使用稀释度大于十倍的稀释液。 实验仪器的清洁： 用浸有ase清除剂原液或10倍的新鲜稀释液的纸擦拭仪器表面，再用吸水纸擦净，最后用沾有ase清除剂1000倍新鲜稀释液的吸水纸擦净，晾干。用ase 清除剂原液处理金属器械的时间不能超过5分钟。实验仪器ase 清除剂原液或十倍的新鲜稀释液（新鲜稀释液的存放时间不要超过一天），不要使用稀释度大于十倍的稀释液。 玻璃和塑料器皿的清洁：ase 清除剂的10或100倍的新鲜稀释液中，静置处理5分钟后，用ase清除剂1000倍或10000倍新鲜稀释液浸泡二次以上，倒立晾干后备用。玻璃和塑料器皿工作平台实验仪器ase 清除剂的10倍或100倍新鲜稀释液（新鲜稀释液的存放时间不要超过一天），不要使用稀释度大于1000倍的稀释液。 移液枪的清洁：根据生产厂家的使用手卸下移液枪的前端，留下接口塞和圈套后将其浸放在ase清除剂的10或100倍的新鲜稀释液中一分钟，用ase清除剂1000倍或10000倍新鲜稀释液彻底冲洗后，晾干，装回移液枪。 塑料离心管和滴头的清洁: 将反应塑料离心管和滴头充分浸泡在ase清除剂的1000倍的新鲜稀释液中5分钟以上(最好不要有气泡)， 然后再用ase清除剂1000倍或10000倍的新鲜稀释液充分浸泡两次，试管或离心管可立即使用或干燥后备用ase 清除剂稀释度与RNase的灭活效果 0.5 ug 5 ug 50 ug 100 ug 原液 + + + + 10倍稀释 + + + + 100倍稀释 + + + - 1000倍稀释 + - - - 表注：所有灭活为室温静置放置5分钟，“+”表示百分百灭活，“-”表示部分灭活或不能灭活。RNase为1.5 mL塑料离心管干，稀释液为新鲜稀释EPC的三大理由 1．DEPC对人体有害。DEPC为高活性烷化试剂，能对蛋白质进行共价修饰，使其组胺基团的乙氧基甲酸化（RNase A活性位点有两个组氨酸，故能被灭活）；同时它还能使RNA分子中没配对的腺嘌呤羧甲基化，改变其活性，严重时甚至会影响RNA形成杂交双链的能力。由于上述反应没有选择性，故对人体十分有害，归为强致癌物使用时十分小心。 2．不能用DEPC处理下列溶液：一是含一级胺的试剂，如MOPS，TRIS， HEPES，PBS等，因其所含一级胺是DEPC攻击的目标；二是不能高压灭菌的溶液（如DTT，dNTP，MgCl2等），因为DEPC必须通过高压灭菌去除；三是不能用于高浓度溶液（如0.1 M NH4Ac或NaAc），在这些溶液中DEPC的半衰期只有几分钟；四是不能用于pH4及以下的溶液，DEPC对RNase没有灭活作用；五是不能与Polycarbonate和Polystyrene等塑料材料接触。 3．DEPC溶液不适合用于某些实验；一不能用于测OD，因为OD读数跟pH有关，DEPC在溶液中分解后变成乙醇和CO2，部分CO2与水反应形成碳酸，导致pH降低，进而降低OD值。二不能用于体外转录，Ambion报道0.1% DEPC-treated water能使转录效率降低40%，这可能与DEPC降解产物有关。