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预防兽医学专业毕业论文 [精品论文] 蓝耳病毒RX株的分离鉴定和中药体外抗病毒的作用研究 关键词：猪繁殖与呼吸综合征 蓝耳病毒 病毒鉴定 中药治疗 摘要：本研究通过设计PRRSV PCR特异性引物，利用RT-PCR方法对广东地区某疑似暴发PRRS的猪场进行检测，结果为PRRSV阳性。然后用Marc-145细胞对发病猪肺脏、淋巴结进行病毒分离。从肺脏中分离得到一株病毒命名为PRRSV RX株。试验对分离病毒进行了鉴定，电镜观察结果可见胞浆内散布大量呈球形的病毒粒子，直径为40-60nm；病毒的TCID50为10-4.5/0.1 ml。病毒为RNA病毒；RX株经56℃处理20-30min后丧失对细胞的感染力；病毒培养的最佳PH值是6.8-7.0。病毒动物回归试验表明，分离病毒接种40日龄的仔猪，临床表现体温升高和一定程度的呼吸症状。 选用黄芪、板蓝根、甘草、鱼腥草、山楂和青蒿六种中草药和为试验药物进行体外抗病毒试验。中草药采用传统的水煮浸提法分别提取并浓缩成100mg/ml溶液作为原液，高压灭菌处理备用。药物原液倍比稀释成不同浓度以测定其对Marc145细胞的毒性作用，来确定药物的安全浓度。以安全浓度为准，稀释成四个不同浓度在Marc145细胞上做抗病毒试验；采用三种作用方式：先加药物后加病毒，先加病毒后加药物，药物与病毒先作用一段时间后加入，以CPE、病毒滴度和MTT法测得的OD值为观测指标评价药物抗PRRSV病毒的活性，以探讨其抗病毒吸附、抗病毒复制或直接灭活病毒的作用方式。试验结果如下： 各药物对Marc145细胞的安全浓度分别为黄芪12.5 mg/mL、板蓝根3.125 mg/mL、甘草3.125 mg/mL、山楂3.125 mg/mL、鱼腥草1.526 mg/mL、青蒿1.526 mg/mL。 所筛选药物黄芪，板蓝根，甘草，山楂，鱼腥草，青蒿都具有抗病毒吸附作用而且保护作用均显著；先加病毒后加药物时，鱼腥草的作用比较稳定而板蓝根在3.125 mg/mL，1.562 mg/mL保护率最高。药物对病毒的杀灭作用时板蓝根在3.125 mg/mL，1.562 mg/mL的作用比较明显。不同药物对同种细胞的毒性不一样。 综合三种加药方式的效果考虑，板蓝根、青蒿能够抑制病毒，对细胞的保护率较高。 正文内容 本研究通过设计PRRSV PCR特异性引物，利用RT-PCR方法对广东地区某疑似暴发PRRS的猪场进行检测，结果为PRRSV阳性。然后用Marc-145细胞对发病猪肺脏、淋巴结进行病毒分离。从肺脏中分离得到一株病毒命名为PRRSV RX株。试验对分离病毒进行了鉴定，电镜观察结果可见胞浆内散布大量呈球形的病毒粒子，直径为40-60nm；病毒的TCID50为10-4.5/0.1 ml。病毒为RNA病毒；RX株经56℃处理20-30min后丧失对细胞的感染力；病毒培养的最佳PH值是6.8-7.0。病毒动物回归试验表明，分离病毒接种40日龄的仔猪，临床表现体温升高和一定程度的呼吸症状。 选用黄芪、板蓝根、甘草、鱼腥草、山楂和青蒿六种中草药和为试验药物进行体外抗病毒试验。中草药采用传统的水煮浸提法分别提取并浓缩成100mg/ml溶液作为原液，高压灭菌处理备用。药物原液倍比稀释成不同浓度以测定其对Marc145细胞的毒性作用，来确定药物的安全浓度。以安全浓度为准，稀释成四个不同浓度在Marc145细胞上做抗病毒试验；采用三种作用方式：先加药物后加病毒，先加病毒后加药物，药物与病毒先作用一段时间后加入，以CPE、病毒滴度和MTT法测得的OD值为观测指标评价药物抗PRRSV病毒的活性，以探讨其抗病毒吸附、抗病毒复制或直接灭活病毒的作用方式。试验结果如下： 各药物对Marc145细胞的安全浓度分别为黄芪12.5 mg/mL、板蓝根3.125 mg/mL、甘草3.125 mg/mL、山楂3.125 mg/mL、鱼腥草1.526 mg/mL、青蒿1.526 mg/mL。 所筛选药物黄芪，板蓝根，甘草，山楂，鱼腥草，青蒿都具有抗病毒吸附作用而且保护作用均显著；先加病毒后加药物时，鱼腥草的作用比较稳定而板蓝根在3.125 mg/mL，1.562 mg/mL保护率最高。药物对病毒的杀灭作用时板蓝根在3.125 mg/mL，1.562 mg/mL的作用比较明显。不同药物对同种细胞的毒性不一样。 综合三种加药方式的效果考虑，板蓝根、青蒿能够抑制病毒，对细胞的保护率较高。 本研究通过设计PRRSV PCR特异性引物，利用RT-PCR方法对广东地区某疑似暴发PRRS的猪场进行检测，结果为PRRSV阳性。然后用Marc-145细胞对发病猪肺脏、淋巴结进行病毒分离。从肺脏中分离得到一株病毒命名为PRRSV RX株。试验对分