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药理学专业毕业论文 [精品论文] 中药复方中绿原酸与绿原酸单体的跨细胞转运及其机制的比较研究 关键词：中药复方 绿原酸 绿原酸单体 跨细胞转运 药动学 摘要：中药复方药动学研究是中药现代化进程中必须解决的重大和难点课题。药动学包括药物的吸收、分布、代谢和排泄（ADME）四个方面。其中吸收、分布和排泄直接决定于药物的跨膜/跨细胞转运。因此药物的跨膜/跨细胞转运是药动学研究首先要解决的核心问题。 药物跨膜/跨细胞转运机制依赖于建立合适的药物体外吸收模型。来源于人结肠癌细胞的Caco-2细胞系和来源于狗肾近曲小管上皮的MDCK细胞系，是国际上研究药物跨细胞转运机制的常用模型细胞。本论文建立了Caco-2、MDCK两种细胞模型，以中药有效成分绿原酸（Chlorogenic Acid）为研究对象，对绿原酸标准品（CGA）和中药复方双黄连口服液中绿原酸（CGA-SHL）的跨细胞转运特点及其机制进行了较详尽的比较研究，为复方中药的药动学研究提供可借鉴的经验。 1.细胞单层模型的建立与验证。 采用美国组织培养中心（American tissue culture center， ATCC）的Caco-2、MDCK细胞株，Millipore公司的Millicell系统，建立了Caco-2、MDCK细胞单层模型。通过显微镜观察细胞的形态特征，采用跨膜电阻（The trans-epithelia electrical resistance，TEER）和荧光素钠透过等方法对细胞单层模型进行质控，结果显示Caco-2细胞生长21天左右，TEER值达到500-700 Ω·c㎡。MDCK细胞生长7天左右，TEER值均大于140 Ω·c㎡。用荧光素钠进行正向透过实验，2小时后荧光素钠在Caco-2细胞单层的净透过量为3.76 μg·h-1.cm-2，在MDCK细胞单层的渗透率为0.79×10-6 cm·s-1，均符合Caco-2、MDCK细胞模型的要求，表明Caco-2、MDCK细胞模型建立成功。 2.利用细胞单层模型探讨双黄连口服液中绿原酸的跨细胞转运。 对CGA-SHL进行双向转运实验。用M2e酶标仪测定CGA-SHL在不同方向，不同浓度下的跨细胞转运情况并计算累积透过量。在两种细胞模型上，CGA-SHL均有不同程度的吸收和分泌。CGA-SHL在Caco-2细胞模型上的吸收无剂量依赖性。与CGA比较，CGA-SHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30 min），有饱和特征；在MDCK细胞模型上CGA-SHL的累积吸收量随时间逐渐增加，90-120 min??峰值，其后累积吸收量反而减少。与CGA相比，达峰时间短，峰值大；与CGA比较，CGA-SHL在Caco-2细胞模型上的分泌量较小，且无剂量依赖性特点；CGA-SHL在MDCK细胞模型上的累积分泌曲线与Caco-2模型的结果类似：具有饱和性。 在MDCK细胞单层模型上，CGA-SHL的分泌是一可饱和过程。维拉帕米（Verapamil，VER）显著抑制CGA-SHL的跨细胞分泌，特别是对小剂量，中剂量组CGA-SHL的外排抑制作用强，但对高剂量组作用弱。合用丙磺舒（Probenecid，PBD）、牛磺酸（Taurine，TAU）、青霉素钠（Benzylpenicillin sodium， PCG-Na）后，CGA-SHL的分泌量均明显降低。 上述研究证明，CGA和CGA-SHL跨细胞转运存在多种转运方式，既有被动转运，又有主动转运，且转运是双向的，即同时存在吸收和分泌过程，吸收时有反向的外排，分泌时有吸收/重吸收的影响。主动转运过程又有多种转运蛋白参与，P-糖蛋白（P-gp）、有机阴离子转运蛋白（OAT）均介导参与CGA-SHL的分泌。 CGA和CGA-SHL的吸收与分泌均有非常明显的差异。不能以有效单体的药动学参数来解释、推断复方中有效成分的药动学特点，是本文的重要结论之一。 正文内容 中药复方药动学研究是中药现代化进程中必须解决的重大和难点课题。药动学包括药物的吸收、分布、代谢和排泄（ADME）四个方面。其中吸收、分布和排泄直接决定于药物的跨膜/跨细胞转运。因此药物的跨膜/跨细胞转运是药动学研究首先要解决的核心问题。 药物跨膜/跨细胞转运机制依赖于建立合适的药物体外吸收模型。来源于人结肠癌细胞的Caco-2细胞系和来源于狗肾近曲小管上皮的MDCK细胞系，是国际上研究药物跨细胞转运机制的常用模型细胞。本论文建立了Caco-2、MDCK两种细胞模型，以中药有效成分绿原酸（Chlorogenic Acid）为研究对象，对绿原酸标准品（CGA）和中药复方双黄连口服液中绿原酸（CGA-SHL）的跨细胞转运特点及其机制进行了较详尽的比较研究，为复方中药的药动学研究提