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乳鼠心肌细胞可成片生长的分离和培养方法 黄绍代1，2，3，陈 鹏4，吴 超2，胡 丹2，彭 江3，田建伟1，2 (1安徽医科大学，安徽省合肥市 230032；2解放军空军总医院，北京市 100142；3解放军总医院全军骨科研究所，北京市 100853；4中国医科大学第一附属医院，辽宁省沈阳市 110001) 引用本文：黄绍代，陈鹏，吴超，胡丹，彭江，田建伟. 乳鼠心肌细胞可成片生长的分离和培养方法[J].中国组织工程研究，2017，21(24):3875-3880. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.24.018 ORCID: 0000-0002-3988-4355(黄绍代) 文章快速阅读： 文题释义： 可成片生长的心肌细胞：文章在传统的心肌细胞培养方法基础上，培养出可连接成片状生长的心肌细胞，成片生长的心肌细胞可实现同步搏动，避免了单个心肌细胞搏动的不协调性，为心脏组织工程的研究提供更优质的种子细胞，更有利于心肌梗死后心脏的修复和再生。 二次差速贴壁分离法：为获得高纯度、活力好的心肌细胞，需将细胞悬液中的大量的成纤维细胞去除，因为成纤维细胞等分裂增殖能力较强的细胞会逐渐占据优势，并抑制心肌细胞的生长。随着差速贴壁的次数增加，时间的延长，细胞纯度也随之增加，其中，差速贴壁两次心肌细胞纯度提高最为显著且对细胞活性影响不大。 摘要 背景：传统方法培养的心肌细胞活力、纯度仍不高，细胞多呈簇状生长，细胞与细胞之间的联系较少，细胞多呈单个搏动。 目的：改进传统的乳鼠心肌细胞培养方法，获得纯度高、成片生长的心肌细胞。 方法：运用0.1%胰蛋白酶4 ℃过夜消化心肌组织后加入Ⅱ型胶原酶重复消化，二次差速贴壁分离法联合化学抑制剂纯化心肌细胞。倒置相差显微镜下动态观察心肌细胞形态变化，培养48 h后用抗心肌肌钙蛋白T抗体鉴定心肌细胞纯度，连续10 d隔日记录心肌细胞的搏动频率。 结果与结论：①心肌细胞在24 h内贴壁，72 h后成簇状分布，5-7 d细胞连接成片生长；②细胞存活率为96%，免疫荧光鉴定心肌细胞纯度97%以上，连续10 d内心肌细胞搏动频率差异无显著性意义(P 0.05)；③综上，通过这种改进的培养方式获得成片生长的心肌细胞纯度、活力更高，是一种更为有效的乳鼠心肌细胞培养方法。 关键词： 组织构建；组织工程；乳鼠；心肌细胞；原代培养；成片生长；国家自然科学基金 主题词： 小鼠；肌细胞，心脏；细胞，培养的；存活率；氢化可的松；组织工程 基金资助： 国家自然科学基金资助项目 Isolation and culture of neonatal rat cardiomyocytes growing in sheets Huang Shao-dai1, 2, 3, Chen Peng4, Wu Chao2, Hu Dan2, Peng Jiang3, Tian Jian-wei1, 2 (1Anhui Medical University, Hefei 230032, Anhui Province, China; 2Air Force General Hospital of PLA, Beijing 100142, China; 3Key Laboratory of PLA, Institute of Orthopedics, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China; 4the Affiliated First Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China) Abstract BACKGROUND: The cardiomyocytes obtained by traditional culture methods exhibit poor purity and viability, cells grow in clusters, the connection between cells is less, and most of cells beat separately. OBJECTIVE: To obtain high-purity cardiomyocytes presenting with a sheet-like growth by modified culture method. METHODS: Myocardial tissues were digested using 0.1% trypsin at 4 ℃ overnight, and the