孙田 毕业答辩PPT - 副本.pptx

梓醇对小胶质细胞TNFR及PI3K/Akt信号通路的影响 1 2014届硕士毕业论文答辩 答 辩 人：孙 田导 师：李丹清 教授专 业：内分泌 选题依据 2 梓醇 抗氧化 抗凋亡 提高神经可塑性 选题依据 3 各种病理刺激 小胶质细胞活化 保护 损害 短时间低氧 长时间低氧 梓醇可以调节小胶质细胞的功能状态 增强其保护作用，减弱其损害作用 选题依据 4 梓醇可以调节小胶质细胞功能状态 小胶质细胞功能状态可能与TNFR及PI3K/Akt信号通路有关 梓醇调节小胶质细胞功能状态是否与TNFR及PI3K/Akt信号通路有关 实验方法 5 BV2细胞代替小胶质细胞 PC12细胞代替神经元 小胶质细胞细胞 低氧组 常氧组 梓醇组 1、收集各组上清液加入神经元中，MTT法检测神经元存活率 2. 流式细胞技术：检测小胶质细胞MHCII阳性细胞数 3. Western Blot法检测小胶质细胞TNFR1、TNFR2、p-Akt蛋白表达量 统计分析：数据均以均数±标准差表示。两组间比较用t检验，检验标准取P0.05为差异有统计学意义。 1.5h 4h 8h 14h 低 氧 实验方法 6 小胶质细胞功能评价 7 梓醇 + 小胶质细胞 神经元 — 梓醇 神经元 = 神经元 小胶质细胞 除外梓醇对神经元的影响 梓醇浓度的确定 8 1、梓醇+神经元（A图） 梓醇对神经元存活率无影响的浓度 梓醇对神经元无保护作用的浓度 A B 2、梓醇+神经元+H2O2（B图） * * * * 注：与0μg/mL组比较P*＜0.01 注：与0μg/mL组比较P*＜0.01 梓醇浓度的确定 9 上清液 神经元+ H2O2 梓醇 + 小胶质细胞 选取40μg/mL的梓醇进行以下实验 注：与0μg/mL组比较P*＜0.01 * * * 梓醇对小胶质细胞功能的影响 10 梓醇增强小胶质细胞保护作用，减弱细胞损伤作用 注：与损伤对照比较P*＜0.05、P**＜0.01与对应低氧培养组比P#＜0.05、P##＜0.01 梓醇对MHCII表达的影响 11 低氧1.5h：梓醇增加MHCII阳性细胞数 低氧14h：梓醇减少MHCII阳性细胞数 梓醇对PI3K/Akt通路的影响 12 低氧条件下，梓醇增加p-Akt蛋白表达量 注：与常氧培养组比较P#＜0.05、P##＜0.01 与对应低氧组比较P*＜0.05、P**＜0.01 梓醇对TNFR表达的影响 13 低氧下：梓醇降低TNFR1、 增加TNFR2蛋白达量 注：与常氧组比P*＜0.05、P**＜0.01；与对应低氧组比较P#＜0.05、P##＜0.01 讨 论 14 短时间低氧刺激，保护作用，MHCII适度增加 长时间低氧刺激，损害作用，MHCII明显增加 短时间低氧刺激，增强保护作用，MHCII适度增加 长时间低氧刺激，减弱损害作用，MHCII显著减少 功能状态 活化程度 低氧刺激时间 梓醇 低氧条件下，梓醇具有调节小胶质细胞活化及其功能的作用 MHCII小胶质细胞活化的重要标志 + 讨论 15 PI3K/Akt信号通路 1、促凋亡蛋白失活 2、抗凋亡基因的转录和表达 磷酸化的Akt对神经元、胶质细胞的存活具有广泛保护作用 TNFR1主要诱导细胞凋亡 TNFR2主要发挥神经保护作用 研究表明 本实验结果 梓醇：p-Akt蛋白表达量 TNFR2蛋白表达量 TNFR1蛋白表达量 低氧条件下，梓醇调节小胶质细胞功能状态可能是通过调节TNFR及p-Akt来实现的 推测 结 论 16 1、小胶质细胞功能状态与小胶质细胞活化程度密切相关，而后者则与低氧刺激时间有关。低氧条件下梓醇具有调节小胶质细胞活化及其功能的作用。 2、低氧条件下，梓醇调节小胶质细胞功能状态可能是通过调节TNFR及p-Akt来实现的。 致谢 17 感谢我的导师李丹清教授三年来对我学习及生活上的指导与关心。 感谢各位评审答辩老师。 感谢二院内分泌科全体老师在我临床实习阶段给予我的指导。 感谢我的师姐、师妹们对我的帮助。 感谢我的家人及朋友给予我的大力支持。 答辩人：孙田 敬请批评指正 谢谢！ 18 选题依据 19 NGF TNFα TNFR2 PI3K/Akt TNFR1 TrkA MAPK 小胶质细胞 梓 醇 目录 20