微生物检测作业指导书.pptVIP

微生物检测 一、样品的制备 二、培养基与试剂制备 三、实际使用的培养基和试剂的配制 四、微生物实验操作 样品的制备 饮料生产线每两小时取样1次，异常停机时再取一次。每天取样12瓶，然后在12瓶中随机抽取3瓶做微生物检测。 培养基与试剂制备 培养基的实验室制备 培养基的使用 培养基的实验室制备 1、概述 使用脱水培养基和其他含有有害物质（如胆盐或其他选择剂）的成分时，应遵循良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配置。如质量体积、pH、制备条件、灭菌条件和操作步骤等。 2、水 配制培养基应使用蒸馏水或相同质量的水，以排除测试条件下抑制或影响微生物生长的物质。如果蒸馏水是用氯消毒的水制备的，在蒸馏前应先对氯进行中和（见GB/T 6682）盛放蒸馏水的容器最好是中性材料制成的（如中性玻璃、聚乙烯等），在初次使用前腰确认容器中不含有任何抑制因子。 注：有时需使用新制备的蒸馏水，避免水中溶解的二氧化碳。为保证蒸馏水的质量，蒸馏水的电阻率最少应达到300 000Ωcm 3、称量和复水 称量所需量的脱水培养基（注意缓慢操作，必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末），先加入少量的水，充分混合（注意避免培养基结块），然后再加水至所需的量。 4、培养基的溶解 脱水培养基加水后适当加热，并不停搅拌使其快速溶解，必要时，重新溶解。含琼脂的培养基在加热前应先浸泡几分钟。 5、培养基pH的测定和调整 商品化的培养基高压灭菌前后pH值可能变化不大。但采用优质蒸馏水或去离子水配制时，灭菌前无需调节pH值。 6、培养基的分装 将配制好的培养基分装到适当中，根据不同用途，容器的体积可为培养基的1倍、2倍或3倍。 7、培养基的灭菌 湿热灭菌在高压锅或制备培养基的容器中进行，高压灭菌一般采用121 ℃灭菌15min。当培养基体积超过1 000mL时，要对灭菌条件进行适当的调整，但应按照标准或使用说明的规定进行。灭菌过程要通过放置到特定位置的热电藕或测试条进行检测，以保证灭菌的效果。 注：大容量（＞1000mL）的培养基灭菌时可能造成过度加热。 灭菌效果的控制是关键。加热后采用适当的方法冷却，以防加热过度。这对于肠道菌培养基和大容器中的培养基等的灭菌十分重要。 8、培养基的监测 应对经湿热灭菌的培养基进行监测，尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进行监测。 培养基的使用 1、琼脂培养基的融化 将培养基放到沸水浴中或采用相同效果的方法（如高压锅中的蒸汽）使之融化。经过高压的培养基应尽量减少重加热时间，避免过度加热。培养基溶化后放入47℃±2℃的恒温水浴锅中保温，直至使用。融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4h。 2、培养基的脱气 必要时，将培养基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加热15min，加热时松开容器的盖子；加热后盖紧，并迅速冷却至使用温度。 3、平板的制备 倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个至少2mm厚的琼脂层（直径90mm的平皿通常要加入15 mL琼脂培养基）。将平皿盖好后放到水平平面使琼脂冷却凝固。 注：在培养过程中，培养基会损失水分。当水分损失的量大于培养基总量的15%时，就会影响微生物的生长。造成培养及水分损失的因素很多，如培养基成分，平皿中培养基总量和培养箱的类型等（如使用带风扇的培养箱，培养箱中的湿度偏低，平板在培养箱中放置的位置靠近加热管，培养温度过高等），操作时应注意避免。 4、平板的储存 凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和（或）4℃～12℃冰箱的密封袋中，最多存放一周或按厂商提供的标准执行。在平板底部做好标记，标记的内容包括名称、制备日期和（或）有效期。也可以使用适宜的培养基编码系统进行标记。 将倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延长贮存期限。为了避免产生冷凝水，平板应冷却后再装入袋中。贮存前不要对培养基表面进行干燥处理。 对于采用表面接种形式培养的固体培养，应先对琼脂表面进行干燥；揭开平皿盖，将平板倒扣于烘箱/培养箱中（温度设为25℃～50℃）；或放在有对流风的无菌净化台中，直到培养基表面的水滴消失为止。注意不要过度干燥。商业化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。 5、平板的培养 培养时每垛最多堆放六个平板，平板间要留有空隙以保证空气流通，使培养物的温度尽快与培养箱温度达到一致；液体培养基温度与培养箱达到一致取决于很多因素，如体积、内容物量、容器类型、培养类型等；使用厌氧罐时，堆放的平板数可以超过六个。 微生物无菌室基本要求及管理 1无菌室的基本建设要求 1.1根据本实验室所涉及的生物安全等级，无菌室的设计和建设应符合GB 50364和GB 19489的相关要求。 1.2无菌室大小应能够满足检验工作的需要