临床+第十四章+基因工程及常用分子生物学技....ppt

治疗侏儒症的唯一方法：向患者注射生长激素。;450L大肠杆菌培养液提取的生长激素相当于6万具尸体的全部产量;第十四章 基因工程及常见分子生物学技术;第一节 重组DNA技术;一、重组DNA技术相关概念; 限制性内切酶; Ⅱ型限制酶识别序列特点—回文结构 ;Bam HⅠ;（三）目的基因(target gene) ;1.定 义：是携带目的DNA片段进入受体细胞进行扩增 和表达的工具。;质粒 (plasmid);特点： 多克隆位点 筛选标记;1. 化学合成法 2.基因组DNA文库(genomic DNA library) 3. cDNA文库(cDNA library) 4. 聚合酶链反应(PCR);化学合成法获取目的基因;基因组DNA文库;粘性末端连接 ;Bam HⅠ切割反应;2. 平端连接 适用于：限制性内切酶切割产生的平端 粘端补齐或切平形成的平端;导入种类;Bam HⅠ切割反应;1. 直接选择法 (1) 抗药性标记选择 (2) 标志补救 (3) 分子杂交法 ①原位杂交 ②Southern印迹 2. 免疫学方法 如免疫化学方法及酶免检测分析等;(插入失活法) 抗药性标记选择;重组DNA技术基本原理; 以 质 粒 为 载 体 的 DNA 克 隆 过 程;重组DNA技术操作过程可形象归纳为 ;种 类;常用分子生物学技术的原理及应用 The Common Used Techniques in Molecular Biology;一、分子杂交与印迹技术Molecular Hybridization and Blotting Technique;核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形成杂化双链(heteroduplex) 。;复性;1、印迹技术;用放射性核素、生物素或荧光染料标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为“探针”，探针可以与固定在NC膜上的核苷酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。 ;（二）印迹技术的类别及应用;分子杂交实验; 二、聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR) ; 末代沙皇尼古拉II 1918年的流行性感冒病毒 电影《侏罗纪公园》 辛普森杀妻案 ; 上述四件事情到底有什么相关呢？ ; PCR最大的特点是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。 ; PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），他因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。 ; ;变性 95 ?C;模板DNA 特异性引物 耐热DNA聚合酶 dNTPs Mg2+;5?;Cycle 3;4. PCR技术的主要用途;核酸序列分析的基本原理：;DNA链末端合成终止法;C;DNA链末端合成终止法;四、遗传修饰动物模型的建立及应用 The Establishment and Application of Heredity-Modified Animal Model ;转基因技术;多利诞生过程;1、克隆人的身份难以认定，他们与被克隆者之间的关系无法纳入现有的伦理体系。 2、人类繁殖后代的过程不再需要两性共同参与，这将对现有的社会关系、家庭结构造成难以承受的巨大冲击。 3、克隆人技术可能会被滥用，成为恐怖分子的工具。 4、从生物多样性上来说，大量基因结构完全相同的克隆人，可能诱发新型疾病的广泛传播，这对人类的生存是不利的。 5、克隆人可能因自己的特殊身份而产生心理缺陷，形成新的社会问题。 ;第三节 重组DNA技术与医学的关系;一、疾病基因的发现与克隆; 治疗侏儒症的唯一方法，是向人体注射生长激素。而生长激素的获得很困???。以前，要获得生长激素，需解剖尸体，从大脑的底部摘取垂体，并从中提取生长激素。 现可利用基因工程方法，将人的生长激素基因导入大肠杆菌中，使其生产生长激素。人们从 450 L大肠杆菌培养液中提取的生长激素，相当于6万具尸体的全部产量。 ;×;+; ; ADA基因+ 载体（逆转录病毒） 重组DNA分子