蛋白表达的亚细胞定位影响基因免疫诱导的体液-中国医药生物技术.pdfVIP

270 中国医药生物技术 2012 年 8 月第 7 卷第 4 期 Chin Med Biotechnol, August 2012, Vol. 7, No. 4 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.04.004 ·论著· 蛋白表达的亚细胞定位影响基因免疫 诱导的体液免疫应答水平的研究 杨军，陈晓黎，王一理，司履生 【摘要】 新的技术路线，但是，基因免疫虽能高效诱导功能 目的 研究表达产物的不同亚细胞定位对基因免疫诱导的 性 CD8+CTL 应答，而诱导的体液免疫应答水平却 体液免疫应答水平的影响，为基因疫苗的设计提供参考。 通常有限[4]，这成为严重制约基因疫苗在预防免疫 方法 利用分子克隆技术，分别构建能表达不同细胞定位的 中应用的最大障碍之一。因此，研究不同因素对基 EGFP-HPV16L1 融合蛋白和截短型 EGFP-HPV16L1△NLS 因免疫应答的影响，提高基因免疫诱导的体液免疫 融合蛋白的重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1 和 pcDNA-EGFP- 应答水平，无论是对基因疫苗能否成功用于感染性 HPV16L1△NLS 真核表达载体；通过转染 CHO 细胞，并 疾病的免疫预防还是通过基因免疫途径制备高效 在倒置荧光显微镜下观察表达产物的细胞定位；用重组 价抗体均具有十分重要的理论和现实意义。 pcDNA 载体免疫 BALB/c 小鼠；EGFP 作为抗原，ELISA 提高基因疫苗的免疫效果一直是基因疫苗研 法检测血清抗体吸光度。 究的重要内容之一[5-7] 。众多学者试图通过采用基因 枪、电穿孔等不同的免疫途径和免疫佐剂以及优化 结果 ①重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1 转染的 CHO 细胞 表达载体的调控元件，或者在表达产物上游加入分 核内可见到绿色荧光，pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 真核 表达载体转染的 CHO 细胞质内可见到绿色荧光；②两种 泌性前导序列等方式，以期提高基因免疫所诱发的 体液免疫应答水平，获得高效价的特异性抗体。但 不同的重组 pcDNA 载体均可诱导 BALB/c 小鼠体液免疫 是，表达产物本身在细胞内的不同定位对基因免 反应，但重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 真核表达载 疫诱发的体液免疫应答水平的影响却知之甚少。本 体免疫组小鼠 IgG 抗体 A450 值显著高于重组 pcDNA- 研究通过构建能表达不同细胞定位的 EGFP- EGFP-HPV16L1 真核表达载体免疫组小鼠 IgG 抗体 A450 值（P 0.001 ）。 HPV16L1 融合蛋白和 EGFP-HPV16L1△NLS 融 合蛋白的重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1 和 pcDNA- 结论 表达产物的不同细胞定位可影响基因免疫诱发的体 EGFP-HPV16L1△NLS 真核表达载体，研究表达产 液免疫应答水平，定位于细胞质内的蛋白分子较定位于细胞 物在细胞内的不同定位对基因免疫诱导的体液免 核的蛋白分子能诱导机体更强的体液免疫反应，这为以增强 疫应答水平的影响。 体液免疫反应为目的的基因疫