穿心莲转录因子apnac1的克隆亚细胞定位及原核表达-中国中药杂志.pdfVIP

２０１７年３月 第４２卷第５期 Ｖｏｌ４２，Ｎｏ５ Ｍａｒｃｈ，２０１７ ·分子生药学 · 穿心莲转录因子ＡｐＮＡＣ１的克隆、亚细胞 定位及原核表达 １，２ ３ ２ ２ ２ ２ 王健 ，齐梦蝶 ，郭娟 ，申业 ，林慧馨 ，黄璐琦 （１安徽中医药大学 药学院，安徽 合肥２３００３８； ２中国中医科学院 中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地，北京 １００７００； ３北京中医药大学 中药学院，北京 １０００２９） ［摘要］　从穿心莲叶片中克隆了１个ＮＡＣ家族的转录因子，命名为ＡｐＮＡＣ１，ＧｅｎＢａｎｋ注册号为ＫＹ１９６４１６。生物信息学分析 表明该基因的完整编码区包含９７２ｂｐ，编码１个３２３个氨基酸的多肽，预测蛋白相对分子质量为３５９ｋＤａ，等电点为６１４。原 生质体瞬时表达研究证实了ＡｐＮＡＣ１ＧＦＰ融合蛋白特异定位在穿心莲叶肉细胞的细胞核中，是一个核定位蛋白。实时定量 ＰＣＲ结果表明ＡｐＮＡＣ１基因表达与穿心莲内酯的积累模式一致：主要在穿心莲的叶片里表达，而且茉莉酸甲酯处理能急剧上 调其表达水平。ＡｐＮＡＣ１基因在大肠杆菌中进行异源表达，并且被成功纯化。该研究为进一步探索ＡｐＮＡＣ１蛋白参与穿心莲 内酯生物合成的研究奠定了基础。 ［关键词］　穿心莲；ＮＡＣ转录因子；亚细胞定位；表达模式；原核表达 Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ ＡｐＮＡＣ１ｇｅｎｅｆｒｏｍＡｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓｐａｎｉｃｕｌａｔａ １，２ ３ ２ ２ ２ ２ ＷＡＮＧＪｉａｎ ，ＱＩＭｅｎｇｄｉｅ，ＧＵＯＪｕａｎ，ＳＨＥＮＹｅ，ＬＩＮＨｕｉｘｉｎ ，ＨＵＡＮＧＬｕｑｉ （１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＡｎｈｕｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｆｅｉ２３００３８，Ｃｈｉｎａ； ２ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＤａｏｄｉＨｅｒｂｓＢｒｅｅｄｉｎｇＢａｓｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＲｅｓｏｕｒｃｅＣｅｎｔｅｒｆｏｒＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ， ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ； ３ＳｃｈｏｏｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９，Ｃｈｉｎａ） ［ Ａｂｓｔｒａｃｔ］　ＡｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓｐａｎｉｃｕｌａｔａｉｓｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄａｓｍｅｄｉｃｉｎａｌｈｅｒｂｉｎＣｈｉｎａｆｏｒａｌｏｎｇｔｉｍｅａｎｄａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅｉｓｉｔｓｍａｉｎｍｅｄｉｃ ｉｎａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ＲＮＡｓｅｑｆｏｒＡｐａｎｉｃｕｌａｔａｌｅａｖｅｓｗｉｔｈＭｅＪＡ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄＩｎＡｐａｎｉｃｕｌａｔａｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｄａｔａ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｏｆｏｎｅｍｅｍｂｅｒｏｆＮＡＣｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｆａｍｉｌｙ （ＡｐＮＡＣ１）ｍａｔｃｈｅｄｗｉｔｈａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎＴｈｅｃｏｄｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＡｐＮＡＣ１ｗａｓｃｌｏｎｅｄｂｙＲＴＰＣＲ，ａｎｄＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓ ｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒｗａｓＫＹ１９６４１６Ｔｈｅａｎ