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第一章???色谱基础理论 色谱法的分类 按流动相与固定相的分子聚集状态分类 气相色谱法（气-固，气-液） 液相色谱法（液-固，液-液） 超临界流体色谱（SFC） 按操作形式分类 柱色谱，平面色谱，逆流分配 按色谱过程的分离机制分类 吸附色谱（adsorption ~ ） 利用吸附能力的差别； 分配色谱（partition ~） 利用分配系数的差别； 空间（分子）排阻色谱（steric exclusion ~）或称凝胶色谱法（gel ~） 利用被测物分子大小不同而导致的渗透系数差异。 此外保留指数还与温度、分子结构有密切关系： 与温度有线性关系——由此可求出不同柱温下 的保留指数（GC法）。 例：某物的保留指数在100℃是654，150 ℃是688 ，则可求出125 ℃时的保留指数应为671。 与分子结构有密切关系——可通过分子结构来预测保留指数或反之。 柱效率的参数（色谱峰的区域宽度） 标准差（?，standard deviation) 半峰宽（peak width at half-height，W1/2或Y1/2） 基线宽度（peak width，W或Y） 标准差——在正态分布曲线中，将x=±1处（拐点）的峰宽之半称为标准偏差。在实际工作中,标准差为峰高0.607h 处的峰宽之半。 峰形窄， ?小，分散度小，柱效高。反之，柱效低。 h 0.607h ? ? x x= 0时，曲线的高度为峰高h 半峰宽——也称半腰宽，为色谱峰高之半处的峰宽。W1/2=2.355 ?， W1/2易确定，且比?值大，故测量误差较?小。 h 0.5h W1/2 峰宽——也称基线宽度。对色谱峰两侧的拐点作切线,在极限上所截的距离,称为峰宽。 对色谱峰两侧作切线后为等腰三角形，底边为峰宽，而?为等腰三角形高度之半处的宽度之半，所以 ：W=4? W ? ? ? W h 0.5h 0.607h W1/2 W1/2=2.355 ?，W=4?=1.699W1/2 差速迁移（differential migration） 色谱过程是物质在相对运动着的两相间，分布平衡的过程。 若混合物中二个组分的分配系数或吸附平衡常数不等，则被流动相携带移动的速度不等。 因差速迁移——而被分离。 分配系数（partition coefficient，K ） 在一定条件下，达到分配平衡后： 样品组分在固定相中的浓度（Cs） 样品组分在流动相中的浓度（Cm） K = Cs / Cm = K K与保留时间（ tR ）的关系： tR = t0 （1+K·Vs/Vm） t’R= t0 · K·Vs/Vm Vs为色谱柱中固定相体积， Vm为色谱柱中流动相体积，即固定相间隙体积。 分配系数大——柱上停留时间长 物质的性质及色谱条件? K ? tR 容量因子（capacity factor，k’） （保留因子retention factor， 分配比partition ratio） k’表示平衡后组分在两相中的质量比。 k’= K·（Vs/Vm），（K = Cs / Cm ） k’ =（Cs· Vs）/（Cm· Vm）=Ws/Wm 又根据t’R= t0 · K·Vs/Vm，则有： k’= t’R/t0= tR/t0 -1 tR = t0（k’+1） 0.1～9 0.4～4 TLC 0.2～20 ～2 GC 1～10 2～5 HPLC 可用k’值范围 最佳k’值范围 色谱法 色谱法中 最佳分离 条件与可 用范围的 k’值如表 所示： 根据tR = t0（k’+1）， 有： k’=0， tR = t0 k’=1， tR = 2t0 无保留 分离参数 分离参数用于衡量分离条件的优劣，常用分离度，表示。 分离度（resolution，R） R= 即相邻两峰分开的距离是平均峰宽 [(W1+W2)/2]的几倍。 R大, 分离效果好。 2（tR2-tR1） W1+W2 R=0.5 tR2-tR1=2?，称为2?分离。分离后各峰露出的面积≥68.3% R=1.0 称为4?（峰顶间距为4?），两峰峰基略有重叠，裸露峰面积≥95.4% R=1.5 tR2-tR1=6?，称为6?分离（峰顶间距为6?），分离后各峰露出的面积≥99.7% R﹥1.5 R﹥1.5，称为完全分离 * * 概 述 色谱法是利用物质在不同的两相中分配、吸附或其他亲和作用的差异，通过多次重复使微小的差别积累起来变成大的差异，从而使混合物中各组分达到分离。 色谱技术在近三十多年中的飞速发展已形成一门专门的科学，称为色谱学。广泛应用于各个领域，成为多组分混合物的最重要的分离分析方法。 离子交换色谱（ion ex