发酵工程实验指导2014改.pdf

2014 级生物技术专业发酵工程实验课程计划 发酵工程实验课程共开设两个系列大实验 18 个小实验，每个小实验按照 3 学时准备，全部实验课程共计54学时。详细实验内容如下： 系列实验Ⅰ：液体通气发酵—基因工程菌发酵，共 30 学时： 实验一、基因工程菌菌种活化 3学时 实验二、发酵培养基的正交法优化 3学时 实验三、基因工程菌扩大培养 3学时 实验四、发酵罐的构造及空消 3学时 实验五、发酵培养基的制备及实消 3学时 实验六、基因工程菌发酵工艺过程 3学时 实验七、发酵过程中产物含量测定 3学时 实验八、发酵过程中还原糖的测定 3学时 实验九、发酵过程中生物量的比浊法测定 3学时 实验十、发酵产物的盐析法纯化 3学时 系列实验Ⅱ：液体静置发酵—啤酒发酵，共24学时： 实验一、协定法糖化实验 3学时 实验二、啤酒酵母纯化及扩大培养 3学时 实验三、啤酒酵母的质量检测 3学时 实验四、麦芽汁制备及糖度测定 3学时 实验五、啤酒的主发酵 3学时 实验六、啤酒的后发酵 3学时 实验七、酒精度测定和原麦汁浓度计算 3学时 实验八、啤酒品质鉴定 3学时 系列实验Ⅰ：液体通气发酵—基因工程菌发酵 实验一 基因工程菌菌种活化 实验目的： 了解基因工程菌保藏菌种的活化方法。 实验原理： 基因工程菌的活化是其用于科学研究及教学实验的第一步。保藏菌种处于休 眠状态，各项生理指标与正常生长菌种相比有较大的差异，为了保证研究工作的 严谨性以及实验的准确性，需要通过菌种活化使其恢复正常生长。基因工程菌保 藏菌种的活化与普通微生物菌种一样，只要将其接种到原培养基平板上，置于最 适生长温度下，处于休眠状态的菌体就会快速转入正常生长状态，实现菌种活化。 所不同的是，基因工程菌为了便于转化后的转基因菌株筛选通常带有抗性标记， 用于菌种活化的培养基平板要添加工作浓度的抗生素，在培养基中建立选择压力， 一方面淘汰非转基因菌株，纯化目标菌株；另一方面防止培养过程中出现的无标 记菌株，增加菌种的遗传稳定性。 实验材料： 菌 种：BL21 (pETH-GFP) 试 剂：蛋白胨，酵母粉，氨苄青霉素，氯化钠，琼脂。 仪器及用具：三角瓶、培养皿、高压灭菌锅、恒温培养箱、超净工作台、移 液器、移液器头（枪头）、细菌滤器、0.22 μm 细菌滤膜、塑料注射器。 实验步骤： 1 、培养基制备 （1 ）将培养皿、枪头，细菌滤器、注射器于 121℃灭菌 20 分钟。 （2 ）按如下配方配制培养基，用蒸馏水充分溶解后分装到三角瓶，装量约 为总体积 1/3，最后加入琼脂于 121℃灭菌 20 分钟。待培养基冷却至 40~50 ℃时， 于超净工作台中加入经过滤除菌的氨苄青霉素储液至终浓度 100μg/ml ，混匀后倒 入灭菌后的培养皿中平放静置使培养基完全固化，装量为 20ml/φ90mm 培养皿。 培养基配方：酵母粉 0.5 ％；蛋白胨 1.0 ％；NaCl 1.0 ％；琼脂 1.5～2.0 ％；pH 7.0 2 、平板无菌检查（可省略） 制成的培养基平板在 37 ℃空培养 24 小时，检查无菌后备用。 3 、接种