淀粉酶检测方法.docVIP

工业用α-淀粉酶制剂 1、 定义：1g固体酶粉（或1ml液体酶），于60℃、PH=6.0条件，1h液化1g可溶性淀粉，即为1个酶活力单位，以u/g（u/ml）表示。 试剂和溶液 2.1 原碘液 称取碘11g、碘化钾22g，用少量水完全溶解，然后定容至500ml，则贮于棕色瓶中。 2.2 稀碘液 吸取原碘液2.00ml，加碘化钾20g，用水溶解并定容至500ml，贮于棕色瓶中。 2.3 20g/L可溶性淀粉溶液 称取可溶性淀粉（以绝干计）2.000g，精确至0.001g，用水调成浆状物，在搅动下缓缓倾入70ml蒸馏水，然后以30ml水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至100ml。此溶液需要当天配制。 2.4 磷酸缓冲液(PH=6.0) 称取磷酸氢二钠45.23g、柠檬酸8.07g，用水溶解并定容至1000ml。配好后用PH计校正。 3. 仪器和设备 3.1 分光光度计 应符合GB 9721的有关规定。 3.2 恒温水浴锅 （60±0.2）℃. 3.3 秒表。 3.4 试管 25mm×2000mm。 4. 分析步骤 4.1 待测酶液的制备：称取酶粉1－2g，精确至0.0002g（或液体酶1.00ml），先用少量的磷酸缓冲液（2.4）溶解，用玻璃棒搅拌，将上清液移入容量瓶，沉渣部分继续溶解，最后全部移入容量瓶后定容。（将估计酶活除以4，即酶活力应在3.7-5.6之间），摇匀。通过4层纱布过滤，滤液供测试使用。 4.2 测试 4.2.1吸取可溶性淀粉溶液（2.3）20.0ml于试管中，加入缓冲液（2.4）5.00ml，摇匀后，于（60±0.2）℃预热5min。 4.2.2加入稀释好的待测酶液（4.1）1.00ml，摇匀，准确反应5min。 4.2.3立即吸取反应液（4.2.2）1.00ml于稀碘液5.00ml中，摇匀，并以稀碘液作为空白，于660nm波长处，迅速测定其吸光度（A）。根据其吸光度查附表中酶液的浓度（c）。 计算： X=c×n 式中 X——样品的酶活力（u/g；u/ml） c——测试酶液的浓度（u/ml） n——样品的稀释倍数 所得结果取整数。 附表：吸光度于测试淀粉酶酶浓度对照表 吸光度（A） 酶浓度（c）（u/ml） 吸光度（A） 酶浓度（c）（u/ml） 吸光度（A） 酶浓度（c）（u/ml） 0.100 4.694 0.127 4.559 0.154 4.423 0.101 4.689 0.128 4.554 0.155 4.418 0.102 4.684 0.129 4.549 0.156 4.413 0.103 4.679 0.130 4.544 0.157 4.408 0.104 4.674 0.131 4.539 0.158 4.404 0.105 4.669 0.132 4.535 0.159 4.399 0.106 4.664 0.133 4.529 0.160 4.394 0.107 4.659 0.134 4.524 0.161 4.389 0.108 4.654 0.135 4.518 0.162 4.385 0.109 4.649 0.136 4.513 0.163 4.380 0.110 4.644 0.137 4.507 0.164 4.375 0.111 4.639 0.138 4.502 0.165 4.370 0.112 4.634 0.139 4.497 0.166 4.366 0.113 4.629 0.140 4.492 0.167 4.361 0.114 4.624 0.141 4.487 0.168 4.358 0.115 4.619 0.142 4.482 0.169 4.352 0.116 4.614 0.143 4.477 0.170 4.347 0.117 4.609 0.144 4.472 0.171 4.342 0.118 4.604 0.145 4.467 0.172 4.338 0.119 4.599 0.146 4.462 0.173 4.333 0.120 4.594 0.147 4.457 0.174 4.329 0.121 4.589 0.148 4.452 0.175 4.324 0.122 4.584 0.149 4.447 0.176 4.319 0.123 4.579 0.150 4.442 0.177 4.315 0.124 4.574 0.151 4.438 0.178 4.310 0.125 4.569 0.152 4.433 0.179 4.306 0.126 4.564 0.153 4.428 0.180 4.301 0.181 4.29