α1-抗胰蛋白酶真核表达载体的构建及其细胞内定位.pdfVIP

South ·408· Med 南方医科大学学报(J Univ) 2009；29(3) 仅。．抗胰蛋白酶真核表达载体的构建及其细胞内定位 刘承武，胡水旺，陈登宇，冯国开，邓鹏，姜勇(南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验 室。广东广州510515) 摘要：目的构建鼠仪广抗胰蛋白酶(AAT)的真核表达载体，观察其在NIH3T3细胞中的表达及定位情况。方法提取 3T3细胞，在荧光显微镜下观察结果。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定 记的载体pcDNA3．HA上．随后转染NIH 3T3细胞中表达，表达产物主要定位在细胞质中。结论成功构建带 证明构建正确。转染实验发现，该质粒能够在Nm HA标签的从T真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位，为下一步深入研究从T在细胞内 的相关生物学功能提供了一个重要工具。 关键词：仅．．抗胰蛋白酶；血凝素；细胞内定位；载体构建 中图分类号：R363．21文献标识码：A 文章编号：1673-4254(2009)03．0408一04 Constructionofa vectorfor andthelocalizationof eukaryoticexpression alpha·-1-—antitrypsin the inNIH3T3cells expressionproduct LIU Shui—wang，CHENDeng—yu，FENGGuo-kai，DENGPeng，JIANGYong Cheng-WU，HU and ofProteomicsof Medical of Laboratory Province，Southern DepartmentPathophysiologyKey Guangdong 。 510515，China Toconstructa vectorfor anddetectits and Abstract：Objectiveeukaryoticexpression alpha-1一antitrypsin(AATlexpression inNm3T3cells．MethodsThetotalRNAwasextractedfromthelivertissueofBALB／emice．andthe localization formouse accession RT-PCRand coding AAT(GenBank amplifiedby correspondingsequences No．NM一009243)were clonedinto vector constructwasthentransactedintoNIH3T3 hemagglutinin(HA)一taggedpcDNA3-HA．The cells，which recombmantWas wereobservedunderfluorescence The verified and