固氮球形芽孢杆菌与巨大芽孢杆菌的混合增效作用-核农学报.pdfVIP

核 农 学 报 　2000 ,14 (6) :337～34 1 337 　 A cta A g ricult u rae N ucleatae S i nica ( ) 文章编号 : 1000855 1 2000 0633705 　 固氮球形芽孢杆菌与巨大 芽孢杆菌的混合增效作用 1 ,2 2 2 2 龙 　苏 　李法峰 　陈　明 　林 　敏 ( 1 湖南医科大学 　湖南 长沙 　4 10078 ; 2 中国农业科学院原子能利用研究所 　北京 　100094) 摘要 :球形芽孢杆菌B s7 与巨大芽孢杆菌 Bm 10 1 混合培养时具有固氮增效作用 。稀 释 400 倍的巨大芽孢杆菌的无菌上清液与球形芽孢杆菌共培养 , 同样能增强后者的 ( ) 固氮活性 。B s7 pAB576 在纯培养时的 nifA 表达活性为 68495 Miller 单位 ,与巨大 芽孢杆菌上清培养液进行混合培养时的表达活性为 75004 Miller 单位 。上述结果 表明:某些微量非碳源的活性分泌物和某些固氮调节基因可能在固氮增效作用中起 重要作用 。在与水稻联合培养条件下 ,混合接种球形芽孢杆菌与巨大芽孢杆菌可以 提高固氮菌在水稻根表的定殖能力 。 关键词 :球形芽孢杆菌 ; 巨大芽孢杆菌 ;混合培养 ;nifAlacZ 融合基合 球形芽孢杆菌B s7 与巨大芽孢杆菌Bm 10 1 均分离自我国华北地区水稻根际 ,具有较高的 固氮能力 。在对球形芽孢杆菌与巨大芽孢杆菌研究中曾发现两菌在共培养时有显著的固氮混 合增效现象 ,但增效机制尚不清楚 。丘元盛等曾报道 ,粪产碱菌 A 15 与阴沟肠杆菌 E26 混合 培养时具有明显的固氮增效作用[ 1 ] 。另据国外学者的报道[2 ,5 ] ,小麦和水稻等作物混合接种 固氮菌 ,其接种的促生或增产效果明显优于单一菌株接种[2 ,3 ] 。已有的研究证据表明 , 固氮混 合增效是一种代谢的协同作用 ,通过混合培养使不同菌种相互作用 ,相互提供营养或通过一些 物理 、生化机制相互刺激 ,从而促进固氮菌固氮能力的提高[4 ,5 ] 。本文针对联合固氮菌混合增 效现象 ,在生化和基因表达水平上开展固氮混合增效的有关机制研究 。 1 　材料与方法 球形芽孢杆菌B s7 和巨大芽孢杆菌Bm 10 1 采用 Dobereiner 限制性培养基进行培养[ 1 ] ,培 [ 8 ] ( ) 养基配方与培养条件参见林敏等 的方法 。供体菌 E . col i S17 . 1 pAB576 的培养介质为含 ( 50) ( 10 ) 卡那霉素 Km 和四环素 Tc 的LB 培养基 。球形芽孢杆菌的 nifA 接合子在含有卡那霉素 ( 50) ( 10) Km 和四环素 Tc 的Dobereiner 限制性培养基中生长 。试验中所用的菌株和质粒见表 1 。 ( ) [6 ] 球形芽孢杆菌与 E . col i S17 . 1 pAB576 的接合实验按 Rhij n 等方法进行 。在含有卡那 ( 50) ( 50) β 霉素 Km 和四环素 Tc 的Dobereiner 培养介质中筛选接合子 。接合子 半乳糖苷酶活性 测定参照