基因突变技术在抗体亲和力体外成熟中的应用.PDF

浙江大学学报 农业与生命科学版 421:1~7,2016 ( ) () JournalofZheian Universit A ric.LifeSci. j g y(g ) htt:///ar p j j g E-mail:zdxbnsb@ j DOI:10.3785/.issn.1008-9209.2015.03.251 j 基因突变技术在抗体亲和力体外成熟中的应用 刘媛 林曼曼 张霄 徐重新 焦凌霞 仲建锋 武爱华 刘贤金* , , , , , , , 江苏省食品质量安全重点实验室和农业部食用农产品安全监控重点开放实验室 南京 ( , 210014) 摘要 从天然抗体库中筛选得到的抗体通常亲和力较低 在微摩尔水平 同时 经过多次免疫获得的天然抗体也存 , ; , 在 的亲和力极限 然而 以抗体亲和力体内成熟为理论基础的亲和力体外成熟技术 可以模拟体细胞 100 mol/L . , , p 、 高频突变和克隆选择过程 该技术可以解决库来源抗体亲和力不高 实际应用难的问题 也可以帮助天然抗体突破 . , 其亲和力极限 抗体基因体外突变技术可以模拟自体高频突变过程 是抗体亲和力体外成熟的重要手段 常见的抗 . , , 、 、 、 体基因体外突变技术可以分为易错聚合酶链式反应 olmerasechainreaction,PCR DNA改组 突变株 定点突 (p y ) 变和链替换等方法 易错 可以在抗体基因全长或部分区域随机引入突变 但随着突变率的增加 阳性克隆数 . PCR , , 量呈指数性递减 改组包括抗体片段随机化切割和重组步骤 可以加快抗体的体外进化速度 突变株法易于 .DNA , . 构建超大容量的抗体库 但有害突变和突变率难以控制 定点突变的区域通常选择与抗原直接接触的互补决定区 , . 或自体突变热点进行操作 链替换通常保留母体抗体的一条重链或轻 com lementardeterminationreion,CDR . ( p y g ) 链 而对另一条链进行随机化组合 这些基因突变方法在提高抗体亲和力中获得了不同程度的应用 但也存在效率