H2O2氧化刺激对紫杉醇耐药和敏感肺癌细胞的不同影响-tumor-肿瘤.PDF

肿瘤2013 年5 月第33 卷第5 期　TUM OR Vol. 33, May 2013　　 4 15 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2013.05.006 Copyright© 2013 by TUM OR Basic Research 基础研究 · H O 氧化刺激对紫杉醇耐药和敏感肺癌细胞的不 同影响 2 2 1 1 1, 2 李　蕊 ，刘建军 ，黄　钢 1. 上海交通大学医学院附属仁济医院核医学科，上海　200127；2. 上海交通大学医学院健康科学研究所，上海　200025 [ 摘要 ]　目的：探讨��腺癌��株 A549 及紫杉醇 （paclitaxel ）耐药��株 A549/Taxol 对于 H2 O2 氧化刺激的不 �反应性及可能的作用机制。方法：用不�浓度的 H2 O2 处理 A549 及 A549/Taxol ��后，采用��计数试剂盒 -8 （cell counting kit-8，CCK-8 ）检测��存活率，并计算半数��抑制浓度 （half inhibitory concentration，IC50 ）值； 采 用荧光探针氯 甲基 -2 ’，7 ’- 二氯二氢荧光素二 乙酯 [5- （and-6 ）-chloromethyl-2 ’，7 ’-dichlorofluorescein diacetate acctyl ester ，CM-H2DCFDA] 染色法检测�� 内活性氧 （reactive oxygen species，ROS ）水�平�；�甲基罗 丹明甲酯 （tetramethylrhodamine methyl ester perchlorate，TMRM ）染色法检测��线粒体膜 电位水�平�；Annexin Ⅴ-FITC/PI 双染法检测��凋亡率；实时荧光定量 -PCR 法检测��内超氧化�歧化酶 1 （superoxide dismutase 1， γ SOD1）、SOD2 、过氧化氢酶 （catalase，CAT ）、 - 谷氨酰半胱氨酸链接酶 （glutamate-cysteine ligase，GCL ）、谷 胱甘肽合成酶 （glutathione synthetase，GSS ）�谷胱甘肽还原酶 （glutathione reductase，GSR ）mRNA 表达的变化。 结果：耐药��株 A549/Taxol 对 H O 的 IC 值高于亲本��株 A549 ；采用低毒浓度 H O （50 � 100 μmol/L ） 2 2 50 2 2 作用 2 h 后，A549/Taxol ��中的 ROS 水�平�增高幅度显著低于 A549 ��，A549/Taxol ��的线粒体膜电位保持 相对稳定而 A549 ��显著增高，且 A549/Taxol ��的凋亡发生率显著低于 A549 ��。A549/Taxol ��中抗氧 化系统相关基因 SOD1、SOD2 、CAT 、GCL、GSS � GSR mRNA 的表达量高于 A549 ��；在 H2 O2 作用后， A549 ��中上述基因表达量显著增高，而 A549/Taxol ��中仅 GSR mRNA 表达上调。结论：紫杉醇耐药��对 氧化刺激的耐受能力显著高于敏感��株，其机制可能与耐药�� 自身氧化 - 还原平�衡系统的适应性变化有关。 [ 关键词 ]　癌，非小细胞肺；紫杉醇；抗药性，肿瘤；氧化