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纸层析法实验.ppt
氨基酸的分类鉴定 纸层析法 一、实验目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析的基本原理及操作方法。 二、实验原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 层析溶剂由有机溶剂和水组成。 物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的： 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 三、实验器材 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸 四、实验试剂 1、扩展剂： 是4份水饱和的正丁醇和一份醋酸的混合物。将20ml正丁醇15ml水放入分液漏斗中混匀，充分振荡，静置后分层，放出下层水层，再和5ml冰醋酸混合。取漏斗内的扩展剂约5ml置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用。 2、氨基酸溶液： 0.5％的赖氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合物（各组分浓度均为0.5％） 3. 显色剂: 0.1％茚三酮-正丁醇溶液 六、注意事项 在操作过程中，手不要摸滤纸。 点样直径不超过3mm 。 点样的一端朝下, 扩展剂的液面需低于点样线1cm。 即时取出滤纸, 以免出现氨基酸层析跑到滤纸的外面不能检测。 * 五、操作方法 将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中 取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2－3cm处用铅笔划线， 每隔2cm做一个记号 用毛细管将各氨基酸样品分别点在这四个位置，干后再点一次 用別针缝成筒状，将盛有20ml扩展剂大额培养皿迅速置于密闭 的层析缸中并将滤纸直立于培养皿中，待溶剂上升15－20cm时取 出滤纸，用铅笔描处溶剂前沿界限，自然干燥或用吹风机热风吹干 用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液, 置于烘箱中烘烤5min（100℃）或用热吹风吹干 计算各种氨基酸的Rf值 *
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