实验一大肠杆菌的培养与分离(必威体育精装版).pptVIP

2008-10 苍南中学 许允文 一、基础知识 朊病毒（蛋白质病毒） 4）细菌的外形与大小 细菌：单细胞不分枝的原核微生物。 细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色（革兰氏染色）后显微镜观察 革兰氏染色： 代谢类型： 主要分布： 危害： 应用： 二、微生物的培养: 五、大肠杆菌的培养与分离 实验目的: 1、进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养操作。 2、进行大肠杆菌的分离，利用固体培养基进行细菌的划线培养。 3、说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。 2、灭菌 菌落——单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。 自养菌: 异养菌: 腐生菌 寄生菌 大部分病原菌 伊红美蓝培养基鉴别大肠杆菌的原理：当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。 在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。 常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。 4)培养基的配制与灭菌 三、细菌的分离： 原理: 不同的细胞具有不同的菌落特征; 有些微生物对抗生素、高盐等具有抗性的特点。 方法: 划线法 选择培养基培养 灼烧接种环 冷却 划线 （第一区域） 蘸取菌液 灼烧接种环 冷却 划线 （第二区域） 灼烧接种环 冷却 划线 （第三区域） 灼烧接种环 冷却 划线 （第四区域） 灼烧接种环 冷却 划线 （第五区域） 灼烧接种环 平板倒置放置培养 平板划线分离法的注意事项： 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. 2.划线首尾不能相接 3.划线后,培养皿倒置培养12~24h 分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一 单菌落 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2. 在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3. 在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 4. 在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上. 2、涂布分离法 思考：划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？ 划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。 涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。 平板稀释涂布法 平板划线法 五、培养 将接种后的培养皿放入恒温箱内，在37℃下培养12-24h。 若在连线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离 微生物的恒温培养 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染? (1)胆大心细，操作快捷。（2）注意灭菌操作原则，灭菌彻底，降低环境污染概率。（3）注意微生物生长条件，如PH、渗透压、温度等。细菌喜碱，喜蛋白质，喜37度；霉菌喜酸，喜糖，喜25-30度 2.在培养后如何判断是否有杂菌污染? （1）菌落的形态看，是否湿润，透明，粘稠，颜色等。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。 （2）显微镜观察其形态、