分子生物学常用技术WXK-3PCR技术4生物芯片.pptVIP

（二）待测样品核酸的提取、扩增与标记 从细胞中提取总RNA 纯化mRNA 逆转录法合成荧光标记的 cDNA 扩增（PCR） 纯化标记的扩增产物 （三）杂交与清洗 预杂交 杂交 清洗 （四）扫描与分析 标准化处理 比值分析 二、DNA测序 TCGGATCG CGGATCGA GGATCGAC GATCGACT ATCGACTT TCGGATCG CGGATCGA GGATCGAC GATCGACT ATCGACTT TCGGATCGACTT AGCCTAGCTGAA 65536个八核苷酸阵列 三、基因突变检测 CGAAACGAGTCAAAAGTCC TTTGCTCAGTTTTCA TTTGCTCCGTTTTCA TTTGCTCGGTTTTCA TTTGCTCTGTTTTCA TTGCTCACTTTTCAG TTGCTCAATTTTCAG TTGCTCATTTTTCAG TTGCTCAGTTTTCAG TTTGCTCCGTTTTCA TTTGCTCYGTTTTCA T G C A T G C A 四、基因诊断 五、蛋白质芯片的应用 六、药物研发 1、药物筛选 2、合理用药 3、中草药鉴定 四、基因芯片（gene chip） 生物芯片(biochip) 应用微电子工业加工工艺，在玻璃、塑料、硅片等材 料上加工出用于生物样品分离、反应或分析的微细结构。 目前主要有两大类： 1. 生物活性微阵列 (bioactive microarray) 2. 基因芯片 (gene chip), DNA微阵列 (DNA microarray) 包括多肽、蛋白质、病毒、 细胞等。 蛋白质芯片可直接从体液中检测生物分子（免疫芯片只需少量样品可一次完成对成千上万种抗原或抗体等致病因素或生物样品的检测分析)。 为最重要的生物芯片，广泛用于基因表达谱分析、新基因发现、基因突变及多态性分析、疾病诊断、药物筛选、基因测序等。 DNA microarray 3. DNA sequencing 4.DNA芯片技术DNA chips or microarray 指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交的检测分析，得出样品的遗传信息（基因序列及表达的信息） 由于在制备过程中运用了计算机芯片的制备技术如显微光蚀刻、显微打印等，且常用硅芯片作为固相支持物，所以称为DNA芯片技术 DNA芯片技术的概念 DNA芯片的分类 原位合成芯片 （In situ synthetic GeneChip） Affymetrix公司 DNA微集阵列 （DNA microarray） 斯坦福大学 Patrick Brown研究小组 合成DNA芯片 Affymex Inc. 显微光蚀刻 寡聚核苷酸合成 * * Synthetic Chips 密度大于1000/cm2 Affymetrix Inc. 原位合成芯片 DNA微阵列 DNA微集芯片 Stanford Univ. Patrick Brown 显微打印头 单链DNA/cDNA片段 Microarray Printing DNA微集芯片. 两类DNA芯片的比较 内 容 原位合成芯片 DNA微集阵列 制备方式 光引导原位化学合成 收集探针、显微打印 探针类型 寡核苷酸 cDNA、基因片段、寡核苷酸等 探针长度 短，小于30nt 较长 100～500nt或更长 最高集成度 10万～40万点阵/ 1万～10万点阵/ 平方厘米 专利保护 专利控制严格 无专利控制 * * DNA芯片技术原理 大规模集成的固相杂交 基本原理是核酸分子杂交，即依据DNA双链碱基互补配对、变性和复性的原理 以大量已知序列的寡核苷酸、cDNA或基因片段作探针，检测样品中哪些核酸序列与其互补，然后通过定性、定量分析得出待测样品的基因序列及表达的信息 DNA芯片技术流程 Biological Sample Analyze data Scanner microarray “Hybridize” ar