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乙醛脱氢酶2基因多态性及老年冠心脏病相关性 　【摘要】 　　目的 探讨乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因G487A多态性与老年冠状动脉粥样硬化性心病(CHD)患者的关系。方法 320例行冠状动脉造影的老年患者，根据造影结果分为CHD组169例和非CHD组(对照组)151例，利用多聚酶链反应技术，检测ALDH2基因G487A多态性。结果 基因型频率符合HardyWeinberg平衡；CHD组AA+AG基因型(ALDH2*2/*2+ALDH2*1/*2) 频率明显高于GG型(ALDH2*1/*1)组，与对照组有显著性差异(P=0.011)；Logistic回归分析显示，A等位基因、低HDLC增加了CHD的危险，A等位基因、低HDLC对CHD的发生有协同作用。结论 ALDH2基因G487A多态性与老年冠心病的发病有关，A等位基因可能是CHD发病的遗传危险因素之一。 【关键词】 冠状动脉疾病；基因；多态性，单核苷酸；乙醛脱氢酶2；聚合酶链反应 　　冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD）是目前危及人类生命的最主要疾病之一，其发病机制与斑块破裂和血栓形成有关。近年来研究发现〔1，2〕乙醛脱氢酶2（ALDH2）基因亦参与了CHD的发生发展过程。人类ALDH2基因第487位碱基有一个突变位点，出现碱基置换：鸟嘌呤（G）→腺嘌呤（A），导致该基因表达蛋白的谷氨酸（Glu）替换为赖氨酸（Lys）。故ALDH2基因型在人群中有三种组合方式，GG型：ALDH2*1/1；AG型：ALDH2*1/2；AA型：ALDH2*2/2。日本有两项研究初步探讨了ALDH2基因多态性与CHD的关系，但结论似乎矛盾。一项研究提示ALDH2基因AA型有抗动脉粥样硬化(AS)作用〔1〕。而另一项研究报道ALDH2基因AA型是CHD的危险因素，其可能通过引起高密度脂蛋白(HDLC)浓度下降而致CHD发生〔2〕。在中国ALDH2基因与老年人CHD、AS关系如何，尚未见报道。而且，ALDH2 G487A多态性的等位基因频率在不同种族、地区分布存在明显差异性〔3〕，故有必要探讨ALDH2基因G487A多态性与老年CHD发病之间的关系，这对指导AS和CHD的防治具有重要意义。 　　1 资料与方法 　　1.1 研究对象 　　选择2006年12月至2008年8月本院收治老年患者320例。CHD组169例〔心肌梗死（MI）122例〕，男102例，女67例，年龄61～76岁，平均(67.06±4.10)岁，诊断符合WHO诊断标准，均行选择性冠状动脉造影术(QCA)证实冠状动脉病变的存在，以左主干、前降支、回旋支、右冠状动脉或其主要分支狭窄中至少有一支狭窄≥50%为阳性。非CHD患者(对照组)151例,男94例,女57例,年龄61～78岁，平均(67.37±5.16)岁,经检查左心室功能正常,无CHD的客观证据,冠状动脉造影结果正常。伴有感染、肿瘤、糖尿病、全身免疫性疾病、严重肝肾疾病者除外。所有研究对象均来自济南地区汉族人群,无血缘关系,均于入院后2～5 d行冠状动脉造影。 　　1.2 主要试剂 　　血液基因组DNA提取试剂盒、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购于TIANGEN公司；PCR引物由济南博亚生物技术有限公司合成；Ficoll淋巴细胞分离液为TBD生物制品科技有限公司产品。 　　1.3 方法 　　1.3.1 病例资料收集 　　均于入院后24 h内询问并采集，包括性别、年龄、身高、体重、血压等，计算体重指数,所有患者抽血前1 d晚餐进食普通饮食，并禁食12 h，清晨6：00～7：00时平卧位休息至少30 min后，采集外周静脉血进行血脂、纤维蛋白原等检测，留取部分静脉血-80℃冰箱保存备用。 　　1.3.2 基因型的检测 　　取静脉血2 ml，枸橼酸钠抗凝，Ficoll淋巴细胞分离液分离白细胞，使用基因组DNA提取试剂盒提取DNA。目的DNA片段扩增引物：上游引物5′GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG3′，下游引物5′CCACCAGCAGA CCCTCAAG3′。反应体系50 μl，模板DNA 2 μg，2×Master Mix 25 μl，引物各2 μl，双蒸水补足至50 μl。反应条件：94℃预变性3 min后进入循环：94℃变性45 s，60℃退火30 s，72℃延伸45 s，共35个循环，最后72℃延伸5 min，4℃保存。PCR扩增产物为200 bp。扩增产物在2%琼脂糖凝胶中进行电泳，溴乙啶染色，紫外线分析凝胶成像系统下观察电泳结果。将目标条带切下，使用琼脂糖凝胶回收试剂盒将PCR产物纯化，由济南博亚生物技术有限公司提供目的基因片段测序。 　　1.4 统计学方法 　　采用SPSS13.0统计软件，所有计量资料数据以x±s表示，组间比较行t检验，计数资料以