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Vimentin、CK34βE12在前列腺增生组织中表达探究 　 作者：王艳宁，韩起鹏 ，王嘉伦 【关键词】 前列腺增生;前列腺炎;CK34βE12;Vimentin 　　前列腺增生（benign prostatic hypertrophy，BPH）是男性常见的疾病之一，其发病原因多是以年龄及激素为主。但近年的一些研究发现，在前列腺增生症手术切除的标本中经常发现有炎症的浸润，但对于两者之间的关系目前报道的不多。我们利用免疫组织化学方法研究CK34βE12与Vimentin在BPH组织中的表达，旨在探讨炎症与BPH的关系。 　　1 材料和方法 　　1.1 研究对象 BPH组织标本为中国医科大学和解放军沈阳第202医院2005年4月至11月手术摘除（耻骨上经膀胱途径）的增生前列腺共55例，标本取自于膀胱颈至精阜尾端连线的中点处，均经病理检查诊断为BPH。患者年龄61～85岁，平均75.21岁;经腹B超测定前列腺体积为26.14～107.20cm 3 ，平均47.32cm 3 ;国际前列腺症状评分（IPSS）14～34分，平均22.50分。正常前列腺标本为2005年3月至2006年10月因意外死亡的青年男性尸检前列腺标本，共4例，年龄为26～32岁，平均29岁，均经组织学检查证实为无病理改变。 　　1.2 主要试剂和来源 一抗为鼠抗人CK34βE12单克隆抗体（1∶100）、鼠抗人Vimentin单克隆抗体（1∶100），均购于北京中杉生物试剂公司，二抗为兔抗鼠IgG（Zymed Laboratories Inc.）。S-P超敏免疫组织化学试剂盒（Kit-9706）购自福州迈新生物技术有限公司，DAB酶底物显色试剂盒（ZLI-9032）购于北京中杉生物技术有限公司。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1 HE染色 石蜡标本4μm连续切片，60℃烤片2h。二甲苯脱蜡，经梯度酒精脱水，苏木素染色，清洗，盐酸酒精分化，返蓝，伊红染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 　　1.3.2 免疫组织化学方法 检测采用链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法（即S-P法）。染色方法:（1）脱蜡和水化;（2）微波抗原修复;（3）内源性过氧化物酶阻断溶液室温下孵育15min;（4）非免疫性动物血清室温下孵育15min;（5）第一抗体4℃下孵育过夜，一抗稀释比为:CK34βE12（1∶100）、Vimentin（1∶100）;（6）生物素标记的第二抗体室温下孵育20min;（7）链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液室温下孵育20min;（8）新配制的DAB溶液显色;（9）苏木素复染，中性树胶封片。以上各步骤间均用0.01M PBS缓冲液（pH=7.4）冲洗5min×3次。同时用已知阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。 　　1.3.3 结果判定 每张切片随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞的百分比，以细胞胞浆出现棕色颗粒为阳性表达。按着色细胞百分数记分，小于20%为0分;20%～50%为1分;大于50%为2分。按着色强度记分，无着色为0分;浅棕色为1分;深棕色为2分。将着色细胞百分数记分与着色强度记分相乘，总记分0分为阴性（-）;1-2分为弱阳性（+）;4分为强阳性（++）。 　　1.3.4 统计学分析 采用SPSS for windows11.5统计分析软件进行分析。Plt;0.05有统计学意义。 　　2 实验结果 　　2.1 HE染色 在4例正常前列腺组织中未发现有炎细胞浸润，在55例BPH组织中发现有48例有炎细胞浸润，阳性率为87.2%。 　　 　　2.2 CK34βE12的表达 CK34βE12定位于前列腺基底细胞的胞浆内，呈棕色颗粒。在正常前列腺组织，见呈单层连续环状的棕色颗粒围绕着腺周，2例为阳性。在BPH组织中呈不规则粗线形连续环状的棕色颗粒围绕腺周，可呈多层。55例BPH组织中有30例为阳性，阳性率为54.55%。CK34βE12在有无炎细胞浸润的BPH组织中的表达无显著性差异（表1）。 　　表1 CK34βE12在BPH组织中的表达与炎症的关系（略） 　　2.3 Vimentin的表达 Vimentin定位于前列腺间质细胞的胞浆内，呈棕色颗粒。2例正常前列腺组织为阳性。55例BPH组织中有48例为阳性，阳性率为87.2%。Vimentin在有无炎细胞浸润的BPH组 织中的表达有显著性差异（表2）。 　　表2 Vimentin在BPH组织中的表达与炎症的关系（略） 　　3 讨论 　　前列腺组织主要是由间质和腺体两种成分组成，大量的研究认为BPH是由于其中的某一种成分或是这两种成分混合增生所造成。Bartsch等 ［1］ 发现在正常的前列腺组织中，间质、上