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PDS对二次打击大鼠RAS系统相关基因影响 　【摘要】 目的 探讨二次打击时肾素血管紧张素醛固酮系统(RAS)相关基因的变化和应用人参二醇组皂苷(PDS)后对相关基因的影响。方法 利用失血性休克对Wistar大鼠进行首次打击，给予PDS预治疗;应用脂多糖(LPS)腹腔注入的方式进行二次打击，6 h后处死动物，留取肺脏组织和血清，检测大鼠肺脏组织中血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素原(AGT)、血管紧张素(Ang)Ⅱ受体1和2(AT1和 AT2)的表达，放免法检测大鼠血清AngⅠ、AngⅡ的变化和应用PDS后对以上各指标的影响。结果 二次打击大鼠模型肺脏组织ACE、AGT表达水平明显高于对照组(Plt;0.01)，应用PDS后ACE、AGT表达水平较二次打击模型组明显降低(Plt;0.05)。免疫组化染色结果显示二次打击模型组大鼠肺组织中ACE蛋白和AngII蛋白呈强阳性表达;应用PDS后大鼠肺组织中ACE蛋白和AngⅡ蛋白呈弱阳性表达。放免法检测结果显示：二次打击6 h后血清中AngⅡ含量明显高于对照组(Plt;0.05);应用PDS后AngⅡ含量明显低于二次打击模型组(Plt;0.01);而AngⅠ变化不明显。结论 二次打击可激活RAS，通过增加ACE、AGT表达，促进AngⅡ生成增加，加重肺损伤。而应用PDS可降低ACE和AGT的表达，减少AngⅡ生成，减轻肺损伤。 【关键词】 急性肺损伤;二次打击;内毒素;人参二醇组皂苷;肾素血管紧张素醛固酮系统 急性肺损伤(acute lung injury，ALI)是各种致病因素(创伤、休克、感染、烧伤等)导致的急性进行性呼吸衰竭，其发病机制尚未完全阐明，现在较为公认的是“二次打击”(twohit)学说。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是肾素血管紧张素醛固酮系统(RAS)的主要活性物质，其生物学功能主要体现在调节血管张力、血流及促进细胞生长、增生等方面。近年来研究发现，AngⅡ还具有另一重要功能——致炎作用。它可调节细胞因子、化学趋化因子和黏附分子等多种炎症介质的表达，参与机体炎症相关疾病的发生和发展，也可能是造成ALI的重要因素。本实验以失血性休克作为第一次打击，给予人参二醇组皂苷(PDS)预治疗;应用脂多糖(LPS)腹腔注入的方式进行二次打击，模拟临床上难治性休克引起ALI的病理过程，观察二次打击时RAS系统相关基因的变化和应用PDS后对相关基因的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要试剂 PDS(由吉林大学天然药物研究室提供);Trizol Reagent(购自Invitrogen公司);dNTP、MMLV逆转录酶、oligo(dT)、Taq DNA合成酶(购自Promega公司);琼脂糖(购自Sigma公司);焦碳酸二乙酯(DEPC)、DGL2000 DNA Marker;其他常规化学试剂均为进口或国产分析纯产品。 　　1.2 实验动物及分组 30只成龄Wistar大鼠，由吉林大学医学动物繁育中心提供。雌雄不拘，体重230～250 g。参照体重随机分为：(1)假手术组(S组)：只分离颈总动脉、股动脉、股静脉并插管，但不放血;(2)二次打击模型组(HL组)：即失血性休克+复苏+LPS(2 mg/kg体重);(3)PDS预治疗组(HLP组)：即失血性休克+复苏+PDS(25 mg/kg体重)+LPS(2 mg/kg体重)。 　　1.3 动物模型的建立 模型建立分为首次打击(手术创伤+失血性休克+复苏再灌注)、二次打击(内毒素血症)两个阶段。实验用材料、试剂等均无菌、无热源。(1)Wistar大鼠实验前禁食一夜，正常饮水，次日上午称重，用戊巴比妥(30 mg/kg)腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧固定于鼠板上，无菌条件下分离左侧颈总动脉插管后接三通，与YH4压力换能器相连，接RM6000型四导生理记录仪上，记录血压。无菌条件下分离股动、静脉，分别插管备用。(2)首次打击：待血压稳定10 min后缓慢自股动脉插管放血，并于15 min内使平均动脉压(MABP)降至40 mmHg，形成失血性休克。(3)首次打击后预治疗：通过股动脉放血的方法使血压在40 mmHg维持60 min后，再自股静脉回输自体肝素化血及至少1倍失血量的盐水，30 min内回输复苏，输液完毕后血压恢复达110 mmHg(基础血压的80%)左右。HLP组经腹腔注射PDS(25 mg/kg体重)，而HL组经腹腔注射等体积的葡萄糖溶液(5 ml/kg体重)。(4)二次打击：10 min后HL组、HLP组经腹腔注射LPS(2 mg/kg)，S组注射(5 ml/kg)生理盐水。 　　1.4 标本留取 二次打击后6 h，处死动物。留取血清标本，肺组织部分石蜡包埋，部分液氮冻存。 　　1.5 指标的检测 　　1.