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nm23H1等位基因缺失及喉癌转移相关性探究 　 作者：徐艳萍 金春顺 孙立群 许亚辉 孟粹达 【摘要】 目的 从基因水平探讨nm23H1等位基因缺失与喉癌转移的相关性。方法 采用Southern杂交技术检测30例喉癌组织中nm23H1等位基因缺失情况。结果 颈淋巴结转移组的喉癌组织中nm23H1等位基因缺失率为44.4%(4/9)，明显高于无颈部淋巴结转移组4.8%(1/21)，两组比较差异有统计学意义(Plt;0.05)。nm23H1等位基因缺失与临床分型、分期及病理分化程度无显著性相关(Pgt;0.05)。结论 nm23H1基因在抑制喉癌转移方面起重要作用，nm23H1等位基因缺失可作为喉癌转移潜能及预后判定的重要指标之一。 【关键词】 喉肿瘤;肿瘤转移;nm23基因;基因缺失 nm23基因目前被认为是最有意义的转移抑制基因，由美国国立癌症研究所Steeg等〔1〕于1988年首先从K1735鼠恶性黑色素瘤细胞株中，用消减杂交法分离鉴定出来的。相关研究报道nm23基因与黑色素瘤、肺癌、肝癌等多种人类肿瘤转移相关〔1～3〕，但关于 nm23H1等位基因缺失与喉癌转移的关系，目前国内未见报道。本研究应用Southern杂交技术检测国人喉癌组织中nm23H1等位基因缺失情况，并探讨其与喉癌转移的相关性。 　　1 材料与方法 　　1.1 一般资料 30例喉癌组织及相应的正常喉黏膜组织取自本院耳鼻喉科住院手术病人，均经病理证实为喉鳞状细胞癌。术中取喉癌组织及距肿瘤边缘≥1 cm的正常黏膜，标本置于-80℃保存备用。男21例，女9例，年龄40～76岁，平均年龄61岁，按1987年国际抗癌协会(UICC)的TNM解剖分区、分期及分级标准。声门上型26例、声门型4例;临床分期：Ⅰ期3例，Ⅱ期7例，Ⅲ期10例，Ⅳ期10例;肿瘤分化程度：高分化12例，中分化12例，低分化6例。颈淋巴结转移组9例均为术前即有淋巴结转移(术后经病理证实)，或术后1年内又出现颈淋巴结转移的病人，非转移组21例，为原发肿瘤切除后1年内无局部复发和颈部淋巴结转移的病人。 　　1.2 探针及同位素标记试剂盒 nm23H1 cDNA探针由北京医科大学提供，片段长度900 bp，BamH Ⅰ酶切，随机引物同位素标记试剂盒为Sigma公司生产。 　　1.3 Southern印迹法分析 提取所有癌组织、正常黏膜标本的DNA，取20 μg DNA经BglⅡ酶切完全后，0.8%琼脂糖凝胶电泳，用毛细管转移法将凝胶中的DNA转移至尼龙膜上。42℃预杂交24 h,预杂交液成分为25 mmol/L K3PO4，5×SSC，0.5%SDS，5×Denhardt，50 μg/ml变性的鲑精DNA，50%甲酰胺。用随机引物标记法将α32PdCTP标记到nm23H1 cDNA探针上。过柱纯化探针，热变性后加入到预杂交袋内，42℃杂交24 h。用2×SSC、0.1%SDS洗膜5 min，改用0.1×SSC、0.5%SDS在室温、42℃及65℃洗膜至杂交带区与膜本底的放射性显出差异，将尼龙膜与X线胶片置暗盒内，-70℃放射自显影10～14 d。显影、定影，读片。 　　1.4 统计学分析 采用fisher检验及秩和检验。 　　2 结 果 　　2.1 基因组DNA酶切结果 上述组织的基因组DNA经BglⅡ酶切，与nm23H1 cDNA探针Southern杂交显示，在杂合子出现7.6 kb及2.3 kb两条杂交带，而在纯合子则为单7.6 kb或单2.3 kb杂交带，与正常黏膜组织相比癌组织杂交带缺失则为等位基因缺失。5例喉癌病人存在nm23H1等位基因缺失，其中颈淋巴结转移组喉癌组织中的4例及相应的淋巴结中的3例存在nm23H1等位基因缺失;非转移组喉癌组织中1例存在nm23H1等位基因缺失，均为杂合性缺失。 　　2.2 nm23H1等位基因缺失与喉鳞癌临床疗效的关系 nm23H1等位基因缺失与肿瘤的临床分型、分期及病理分化程度无显著相关性(Pgt;0.05)，见表1。转移组中4例喉癌组织存在nm23H1等位基因缺失，而非转移组21例中仅1例喉癌组织存在nm23H1等位基因缺失，两组比较差异有统计学意义(Plt;0.05)。 　　表1 nm23H1等位基因缺失与喉鳞癌病理及临床特点的关系 　　等位基因缺失无等位基因缺失P值临床分型声门上型521gt;0.05声门型04临床分期Ⅰ03gt;0.05Ⅱ16Ⅲ37Ⅳ19病理分化程度高111gt;0.05中39低15喉癌组织转移组45lt;0.05非转移组120 　　　3 讨 论 　　nm23基因是近年来分离鉴定的一种与肿瘤转移表型抑制相关的基因〔1〕，现已鉴定出两种亚型即nm23H1和nm23H2。nm23H