MPTP诱导小鼠帕金森病模型中相关脑区iNOS时程表达变化.docVIP

MPTP诱导小鼠帕金森病模型中相关脑区iNOS时程表达变化 　 作者：董玉林，张志军，刘 娟，郁晓燕，倪衡建 【摘要】 目的：观察1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）诱导的小鼠急性损伤PD模型中纹状体（CPu）、黑质致密部（SNpc）、额叶皮层联合区（FrA）和腹侧被盖区（VTA）中iNOS基因和蛋白的时程表达变化。方法：用RT-PCR和Western blot方法对MPTP诱导的小鼠PD模型中相关脑区iNOS基因和蛋白的表达量进行检测。结果：MPTP诱导的小鼠PD模型中SNpc和CPu脑区iNOS基因和蛋白在给药后多个时间点均有显著性表达，其中1 d是表达高峰；VTA和FrA脑区iNOS基因和蛋白的表达没有SNpc和CPu脑区表达显著。结论：表达增高的iNOS可能对SNpc和VTA脑区DA能神经元及CPu和FrA脑区的DA能神经元末梢起了损伤作用，从而导致了DA能神经元的减少及其末梢退变的发生。 【关键词】 帕金森病；1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶；诱导型一氧化氮合酶；小鼠 [Abstract] Objective：To observe the time-course expression of iNOS mRNA and protein in CPu，SNpc，FrA and VTA of the MPTP model of PD. Methods: Semi-quantitative RT-PCR and Western blot methods were used to detect the expressions of iNOS mRNA and proteins in these four regions. Results: The expressions of iNOS mRNA and proteins in CPu and SNpc increased significantly at several time points in the MPTP model of PD，and a peak was observed on day1.The expressions of iNOS mRNA and proteins in VTA and FrA increased less than those in CPu and SNpc. Conclusion: The increase in iNOS expression may damage the dopaminergic neurons in SNpc and VTA and the dopaminergic terminals in CPu and FrA. [Key words] Parkinson’s disease （PD）；1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine；iNOS；Mouse 帕金森病（Parkinsons disease，PD）典型的神经病理特征为：中脑黑质致密带（substantia nigra pars compacta，SNpc）中多巴胺（dopamine，DA）能神经元缺失导致纹状体（caudate putamen，CPu）中DA含量降低，而与其相邻的腹侧被盖区（ventral tegmental area，VTA）的DA能神经元却累及较轻[1]。何种分子机制导致PD患者DA能神经元退变至今仍不是很清楚，这也成为有效治疗PD的一大障碍。本课题组之前通过每隔2 h按20 mg/kg给C57BL/6小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP）1次，共注射4次的方法成功制作了小鼠PD模型，并观察到此模型中SNpc、VTA脑区的DA能神经元胞体以及CPu和额叶皮层联合区（Frontal association cortex，FrA）的DA能神经元末梢对MPTP所诱导的毒性反应不同。为证实这一现象是否与这些部位的诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）表达量的不同有关，本文就MPTP诱导的小鼠急性损伤PD模型中SNpc、VTA、CPu、FrA等部位的iNOS基因和蛋白表达的时程变化差异进行探讨。 1 材料与方法 1.1 实验动物和主要试剂 成年雄性C57BL/6小鼠60只，体重28 g左右。由南通大学实验动物中心提供。MPTP（Sigma公司 M0896），Trizol Reagent （Invitrogen），DNA Marker DL2000 （TaKaRa：D501A），逆转