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微波辅助提取野菊花中总黄酮工艺探究 　【摘要】 目的对微波辅助提取野菊花总黄酮的工艺条件及参数进行优化。方法在单因素实验的基础上, 采用L9(34)正交设计, 以野菊花总黄酮的提取率为指标, 探讨料液比、微波辅助提取时间、乙醇浓度、微波功率对提取率的影响。结果最佳提取工艺参数为: 料液比1∶50，提取时间9 min，乙醇浓度(φ)=60 %，微波功率340 W。在上述最优条件下进行了精密度和回收率实验, 所得结果的相对标准偏差为1.9 % ( n =6) , 回收率在97.5 %～101.4 %之间。结论采用微波辅助提取野菊花总黄酮工艺简单可行, 为进一步的工艺开发提供了参考。 【关键词】 野菊花; 总黄酮; 微波辅助提取; 正交实验 野菊花是菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序。近年来研究表明，野菊花含有黄酮类物质。黄酮类化合物是自然界中广泛存在的一类天然产物，药理学研究表明其具有抗炎[1]、抗氧化[2，3]、抗过敏作用[4]以及降低血液和肝脏中胆固醇的作用[5]。提取黄酮的方法有：热水提取法、有机溶剂提取法、碱液提取法、超声波辅助提取法、超临界流体提取法、大孔树脂吸附法、酶法提取等[6]。但对野菊花总黄酮的微波辅助提取研究报道较少。 　　微波提取技术利用微波能快速破坏细胞壁加快活性成分的溶出，而且使许多难溶物质在微波电磁场的作用下得到较好的溶解，从而提高了提取的速度和产率[7～10]。与常规方法比，微波提取具有选择性高、快速高效、溶剂消耗少、活性成分提取率较高、不产生噪音、适合于热不稳定物质的提取等特点[11，12]。 　　为更有效地开发和利用野菊花药材资源，充分提取野菊花中所含的总黄酮成分，本文采用正交设计的方法进行了微波辅助提取工艺研究，以期改善传统的浸提方法，为进一步的开发利用提供参考。 　　1 材料与仪器 　　1.1 材料芦丁对照品(中国药品生物制品检定所);野菊花(广州致信中药饮片有限公司)购自广东药学院附属门诊部药房;实验用水为双蒸水;所用试剂均分析纯。 　　1.2 仪器MSP-100E 微波提取仪(北京雷明科技有限公司);U3010紫外可见分光光度计(日本日立公司);722型光栅分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);FZ102微型植物粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);HH-6电子恒温水浴锅(苏州威尔试验用品有限公司);FA2104电子分析天平(上海天平仪器厂)。 　　2 方法与结果 　　2.1 标准曲线的制备称取在120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品0.200 0 g，置于100 ml 量瓶中，加乙醇70 ml，置于水浴上微热使溶解，冷却至室温，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10 ml，置于100 ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得0. 2 mg/ml 芦丁对照品溶液。精密量取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 ml，分别置25 ml量瓶中，加乙醇至6 ml，加ρ(NaNO2)=5 %亚硝酸钠溶液1.0 ml，混匀，放置6 min，加ρ[Al(NO3)3]= 10 %硝酸铝溶液1.0 ml，摇匀，放置6 min，加ρ(NaOH)=5 %氢氧化钠试液10.0 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min。以乙醇为参比，用1 cm比色皿，于U3010紫外可见分光光度计上，在400～600 nm 波长处进行扫描。结果表明，对照品溶液在510 nm 处有最大吸收，因此选择510 nm 作为测定波长。在510 nm 波长处测定体系的吸收度，以吸收度(A)为纵坐标、浓度ρ芦丁(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=0.0136 ρ芦丁+ 0.006 28 (r=0.999 4)。结果表明，芦丁对照品在所试浓度0.00～56.00 μg/ml范围内呈良好的线性关系。 　　2.2 提取溶剂的选择 　　2.2.1 水提取称取野菊花粉末1.000 0 g于特制的微波提取罐中，加水40 ml，浸泡30 min 后，控制一定压力，在微波功率255 W下提取9 min。趁热过滤至100 ml容量瓶中，药渣用少量水洗涤3次，每次过滤。并入滤液，冷却，用水定容后备用。 　　2.2.2 乙醇提取称取菊花粉末1.000 0 g于特制的微波提取罐中，加φ=50 %乙醇40 ml，混匀，浸泡30 min 后，控制一定压力，在微波功率255 W下提取9 min。趁热过滤至100 ml容量瓶中。药渣用少量乙醇洗涤3次，每次过滤。并入滤液，冷却，用乙醇定容后备用。 　　2.2.3 样品液总黄酮含量测定 移取样品液3.00 ml于25 ml容量瓶中，按标准曲线制备方法进行操作、显色，测定吸光度，由标准曲线得到样品中总黄酮含量。结果见表1。由表1可知，以乙醇作溶剂的提取