开口箭皂苷对人神经胶质瘤细胞作用及相关机制探究.doc

开口箭皂苷对人神经胶质瘤细胞作用及相关机制探究 　 作者：蔡晶，雷林生，朱正光，迟德彪 【摘要】 　　目的 探讨开口箭皂苷体外对人神经胶质瘤U251细胞的作用和其相关机制。方法开口箭皂苷作用于U251细胞后检测其IC50值。溶血实验观察开口箭皂苷对细胞膜的影响。提取U251细胞的DNA分析条带。RT-PCR技术检测开口箭皂苷对U251细胞的bax和bcl-2基因表达的影响。利用激光共聚焦显微技术研究开口箭皂苷对U251细胞内游离钙浓度和pH值的影响。结果开口箭皂苷对U251细胞的IC50值为8.5 μg/ml。不能引起肉眼可见的溶血现象。开口箭皂苷诱发了肿瘤细胞的凋亡，并引起了bax基因表达量的升高和bcl-2基因表达量的下降，并可引起U251细胞内游离钙浓度和pH值的降低。 结论 开口箭皂苷体外可以诱导U251细胞凋亡，其机制可能与上述实验结果有关。　 【关键词】 开口箭皂苷； U251细胞； 凋亡； 机制 　　Abstract：ObjectiveTo investigate the underlying mechanisms of STCB on the apoptotic induction of human neuroglioma cells. MethodsThe inhibitory effect of STCB on U251 cell line was studied. The haemolysis of STCB was observed. The differences of express of bax and bcl-2 genes was compared by RT-PCR. Laser confocal scanning microscopy was used to observe the effects of STCB on the intra-cellular concentration of free cytosolic calcium and the hydrogenion concentration of U251 cells.ResultsThe 50%inhibiting concentration was 8.5μg/ml. STCB did not cause hemolytic crisis but induced the apoptosis of U251 cells with declining expression of bcl-2, raising expression of bax and decreasing of the intra-cellular concentration of free cytosolic calcium and the hydrogenion concentration of U251 cells. ConclusionThe underlying mechanisms of STCB on the apoptotic induction of U251 cells may be associated with the results mentioned above. 　　Key words：STCB; U251 cell; Apoptosis； Mechanisms 开口箭 (Tupistra chinensis Baker)为百合科植物，其根茎具有清热利咽、活血止痛等功效［1～3］。在前期研究中发现提取其中的皂苷部位对小鼠S180肉瘤细胞具有生长抑制及诱导凋亡作用［1］。现进一步探讨开口箭皂苷（Saponin from Tupistra chinensis Baker，STCB）体外对人神经胶质瘤U251细胞的作用和其相关机制，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品与试剂 　　STCB由本实验室自行提取。RPMI-1640培养基，Gibco公司；新生牛血清，杭州市四季青生物工程材料有限公司；Hepes，FARCO化学品供应公司；四苯基氮唑蓝(MTT)，二甲基亚砜(DMSO)，RNase A，PI（Propidium iodide），Sigma公司；荧光探针Fluo-3-AM,SNAFL（Seminaphthofluorescein），Molecular Probes Ins；HEPES，MDBio, Inc分装；DEPC，RT-PCR反应体系，杰特伟公司；oligod(T)18，TaKaRa；琼脂糖（Biowest Agarose）,上海YITO生物器材企业有限公司；溴化乙锭(Ethidium Bromide，EB),上海博彩生物工程公司；引物为英骏公司合成。其余试剂均为分析纯。 　　1.2 动物、瘤株与培养器材SPF