广西藤茶提取物TTF抗鸭乙型肝炎病毒实验探究.doc

广西藤茶提取物TTF抗鸭乙型肝炎病毒实验探究 　【摘要】 目的观察从广西藤茶中提取出的一有效部位TTF抗鸭乙型肝炎病毒的作用。方法选1日龄北京雏鸭，人工感染鸭乙型肝炎病毒（DHBV）动物模型，应用斑点杂交法观察TTF对鸭血清鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的影响。结果DHBV感染鸭在感染后第7天口服TTF药物治疗，75～150 mg/kg组2次/d，10 d对鸭血清DHBV-DNA水平有一定的抑制效果；300 mg/kg组，对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制作用显著，停药3 d未见明显的反跳现象。结论TTF可明显抑制DHBV-DNA复制，提示TTF有抗HBV的作用。 　　 【关键词】 藤茶 鸭乙型肝炎病毒(DHBV) 鸭乙肝动物模型 　　Abstract:ObjectiveTo investigate the anti-HBV effect of TTF.Methods1-day old Beijing ducklings were used as the hepatitis B animal model. DHBV DNA was detected by dot-blot hybridization test. ResultsAfter medicated with TTF for 5 days and 10 days, optical density value(OD value) of DHBV-DNA in ducklings sera was obviously lower than that before treatment, there were different influences in different groups and rebound phenomenon didn`t appear in both TTF-groups 3 days after stopping medication.ConclusionTTF is efficient in treating DHBV,which indicates that TTF has an anti-HBV effect. 　　Key words:Teng cha; Duck hepatitis B virus; Duck hepatitis Model 藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata （Hand-Mazz）W.T.Wang的嫩茎叶，在广西、广东、云南、贵州、福建等均有分布，亦称甜藤茶、田婆茶、乌蔹、红五爪金龙、大齿蛇葡萄。其味甘、淡，性凉，具有清热解毒、祛风湿、强筋骨、消肿止痛之功效。藤茶在民间流传应用已有数百年历史，是瑶族群众的家常备用药。民间用于治疗黄疸型肝炎，感冒发热，咽喉肿痛，急性结膜炎或水煎外洗治疗痈疮湿毒等［1～3］。藤茶主要成分是黄酮类化合物，含量约为45.52%［4］。郑氏［5］研究结果表明藤茶总黄酮对2215细胞分泌的HBsAg抑制率为43.14%,半数有效剂量(IC50)为40.21 μg/ml, 治疗指数(SI)为3.11；对2215细胞分泌的HBeAg抑制率为33.76%；对HBV-DNA有一定抑制作用。为此，笔者对TTF进行体内抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究。现报道如下。 　　1 材料 　　1.1 受试药物TTF为浅黄色粉末结晶，由本校中药化学教研室提供，含量90%以上。 　　1.2 病毒鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)强阳性血清, 采自上海麻鸭, -70℃保存。 　　1.3 试剂DMSO（AR，广州市新港化工有限公司）；α-32P-Dctp（北京福瑞生物技术工程公司）；缺口翻译药盒（普洛麦格公司(Promega Co.)； Sephadex G-50（Ficoll）； PVP（瑞典Pharmacia公司）；SDS（西德Merck公司）；鱼精DNA，牛血清白蛋白均购自中国科学院生物物理所；硝酸纤维素膜0.45 μm（Amersham 公司）。 　　1.4 仪器BP211D万分之一克电子天平（德国赛多利斯）；酶标仪（奥地利SUNRISE）；微量加样器（法国Gilson）；Biofuge Stratos高速低温离心机（德国Heraeus）；座式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）。 　　1.5 阳性对照药拉米夫定（3TC），葛兰素威康制药公司，B008923。 　　1.6 动物1日龄北京鸭, 购自北京前进种鸭动物饲养场。 　　2 方法及结果 　　2.1 TTF抗鸭乙肝病毒实验 　　2.1.1 鸭乙型肝炎病毒感染1日龄北京鸭, 经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA 阳性鸭血清, 0.2 ml/只, 在感染后7 d取血, 分离血清, -70℃保存待检。