库仑电化学法快速测定单胺类神经递质方法学探究.doc

库仑电化学法快速测定单胺类神经递质方法学探究 　 作者：肖凤霞，邓少东，田青，邓超明1，周改莲 【摘要】 目的 建立库仑阵列电化学高效液相色谱法快速测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质的含量。方法 采用库仑阵列电化学检测器检测去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)、5羟吲哚乙酸(5HIAA)，采用Phenomenex C18反相色谱柱(150 mm×4.60 mm，5 μm)，流动相为缓冲液乙腈(体积比87∶13)，流速为1 mL·min-1，柱温为35 ℃。结果 4种单胺类神经递质的最低检测限为0.015 15～0.018 15 ng ,回收率为85.3 %～100.5 %。结论 该法具有快速、准确、灵敏、样品制备简便等优点，可用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的分离检测。 【关键词】 高效液相色谱法;单胺类神经递质;库仑阵列电化学检测器 　　(1.School of TCM,Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou Guangdong 510006,China; 2.Taishan Medical University,Taian,Shandong 271016,China)Abstract:Objective To establish a rapid method for determining monoamine neurotransmitters in rats? brain tissue by HPLC with coularray detector.Methods HPLC was performed on a Phenomenex C18 column(150×4.60 mm,5 micron). The mobile phase,consisted of acetonitrilewater phase(13∶87),was at a flowrate of 1 mL·min-1. The column temperature was kept at 35 ℃. The levels of NE,DA,5HT and 5HIAA were determined.Results The minimum measurement limit was 0.015 15-0.018 15 ng. The average recoveries were 85.3 %-100.5%.Conclusion This method is rapid,accurate,highly sensitive and easy to operate. The procedure is suitable for determining the monoamine neurotransmitters in rats’ brain tissue. 　　Key words:HPLC; monoamine neurotransmitters; coularray detector 　　单胺类物质包括去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)、五羟吲哚乙酸(5HIAA)等物质，是哺乳动物和人类中枢神经重要的信息传递物质。研究该类物质及其代谢产物在体内的含量变化，对于阐明药物在体内的作用机制，提供了有力的依据。尤其在老年痴呆症、抑郁症、儿童多动症、儿童多动秽语综合征等疾病与神经递质含量关系、药物治疗效果等方面的研究中，可提供非常有用的信息[1]。目前文献报道此类物质常见的检测方法主要有高效液相色谱电化学检测器测定法(HPLCECD)、荧光法、放射酶学分析法等[2]。其中以HPLCECD测定法报道的较多，但现有的HPLCECD测定法存在流动相成分复杂[3]、重现性差、检测时间长、样品前处理不彻底等问题。本研究改进了现有的测定方法，建立起一种流动相单一、重现性好、检测时间短、样品处理完全,并可同时测定4种单胺类物质及其代谢产物的检测方法。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　库仑阵列电化学高效液相色谱仪[Model 5600A16通道检测器(美国ESA公司)，Model 582 solvent Delivery System，Model 542 自动进样器，CoularrayWin工作站]，Dionex Tcc100型柱温箱(美国戴安公司);Thermo D37520型高速冷冻离心机(德国Heraeus公司);pHS25型pH计(上海精密科学仪器有限公司);GenPure超纯水系统(德国TKA公司);KQ500型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率500 W,频率40 kHz);3 K超滤管(P