实验三培养基的配置和灭菌.docVIP

环境类微生物专业基础 实验指导书 （适用于环境工程、给水排水工程、环境科学等专业） 赵远 梁玉婷 孙向武 编 环境与安全工程学院 二0一一年十月 前言 人类利用微生物已有几千年的历史，利用微生物处理人类的各种污染物也有100多年的历史。随着生物技术的不断发展和人们对环境质量的日益重视，环境微生物技术在处理环境中的污染物，检测环境的质量，分析污染物对人类可能产生的危害等方面得到了越来越广泛的关注与应用。“环境微生物实验指导书”的编写，旨在与《环境微生物学》理论课相结合，通过实验，加深对讲课内容的理解和记忆，构成一个完整的体系，对环境工程和给水排水专业的学生提供一本相应地实用的实验指导书。 本书分两个部分，第一部分基础微生物学技术，第二部分现代微生物学技术，共10个实验。包括微生物实验技术基础和在环境科学及环境工程中应用技术的内容，除介绍传统的环境微生物实验技术外，考虑到学科发展和拓宽专业适应面的需要，增加了现代微生物学实验技术等有关内容。对每个实验的内容，力求较详细的介绍每种方法的技术特点和基本操作要求，反映现代环境微生物学必威体育精装版的实验技术，同时兼具实用性和可操作性。主要目的是使学生得到微生物学基础实验技术、基本操作和技能训练，同时也初步掌握现代微生物技术的操作方法。本实验指导书主要用于环境与安全工程学院环境工程、给水排水专业和环境科学专业的本科生的微生物学基础实验教材。 本实验指导书借鉴李慧蓉老师编写的《水处理微生物学实验讲义》的框架，以及南京大学杨柳燕老师编著的《环境微生物学实验技术》部分内容，在此编者对李教授和杨教授表示感谢，同时对戴青华老师以及学院的领导对在本实验指导书的编写过程中所起的作用和指导表示感谢。 在本书的编写过程中，由于编者水平和编写时间的限制，难免有遗漏和错误之处，希望广大读者和同行批评指正，以利于以后进一步修改提高。 编者 2011.10  实验注意事项 环境微生物学实验是一门操作技能较强的课程。通过本课程学习，要求学生能牢固地建立无菌概念，掌握环境微生物实验的一套基本操作技术；树立严谨、求实的科学态度，提高观察、分析问题和解决问题的能力；树立勤俭节约、爱护公物、相互协作的优良作风。 为了提高教学效果，保证实验的质量和实验室的安全，实验注意事项如下： 1 每次实验前必须充分预习实验教材，以了解实验的目的、原理和方法。初步熟悉实验操作中的主要步骤和环节、对整个实验的安排做到先后有序、有条不紊和避免差错。 2．非必要的物品不要带进实验室，必须带进的物品（包括帽子、围巾等）应放在不影响实验操作的地方。 3．每次实验前须用湿布擦净台面，必要时可用70%酒精或“新洁尔灭”溶液（01％浓度）。实验前要洗手，以减少染菌的几率。 4．微生物实验中最重要的一环，就是要严格地进行无菌操作，防止杂菌感染。为此，在实验过程中，每个人要严格做到以下几点： ■ 在进行接种操作时，要关闭门窗，以防止空气对流。 ■ 接种时尽量不要走动和说话，以免因尘埃飞扬和唾沫四溅，而导致杂菌污染。 ■ 用过的带菌移液管、滴管或涂布棒等，在实验后应立即投入5％石炭酸或其他消毒液中浸泡20min，然后再取出清洗，以免污染环境。 ■ 在清洗带菌的培养皿、三角烧瓶或试管等之前，应先煮沸半小时或进行蒸汽灭菌。 5．凡需进行培养的材料，都应注明菌名、接种日期及操作者姓名(或组别)，放在指定的温箱中进行培养，按时观察并如实地记录实验结果和按时交实验报告。 6．实验室内严禁吸烟，不准吃东西，以免感染。 7．节约药品和水、电、煤气。 8．各种仪器应按要求操作，用毕按原样放置。 9．实验完毕、立即关闭煤气，整理和擦净台面，离开实验室之前要用肥皂或清洁剂洗手，值日生负责打扫实验室及进行安全检查（门窗、水、电、煤气等）。 10．意外事故的处理： ◆ 如因玻璃器皿打碎而使菌液洒到桌面或地上时、应立即以5％石炭酸液或0.1%新洁尔灭溶液投盖其上，半小时后再擦去。 ◆ 如菌液污染手部时，应先用70％乙醇棉花拭去、再用肥皂水洗刷干净；如污染致病菌时、应将手浸于2％—4％来苏尔或0．1％新洁尔灭溶液中，10min—20min后用自来水刷洗干净。 ◆ 如不慎将菌液及入口中，应立即吐出．并用大量自来水漱口。 目 录 实验一 光学显微镜的使用及微生物形态观察、大小测定和计数 5 实验二 革兰氏染色 9 实验三 培养基的配置和灭菌 12 实验四 纯种微生物的分离、培养及接种技术 15 实验五 菌种保藏技术 18 实验六 微生物的生理生化反应 26 实验八 细菌基因组DNA的提取 39 实验九 PCR扩增 41 实验十 利用DGGE技术对环境样品的微生物群落分析 44