实验五肠道菌分离鉴定3 实验五肠道菌分离鉴定.pdfVIP

实验五实验五实验五实验五 肠道菌分离鉴定肠道菌分离鉴定肠道菌分离鉴定肠道菌分离鉴定--3333 1.1.录像录像录像录像：：厌氧菌感染厌氧菌感染厌氧菌感染厌氧菌感染 2.2.学生操作学生操作 粪便标本分离（粪便标本分离（33）：）：药敏实验及生化反应药敏实验及生化反应 3.3. 示教与讨论：肥达氏试验结果及分析示教与讨论：肥达氏试验结果及分析 4.4. 梅毒梅毒RPRRPR或或TRUSTTRUST初筛初筛 粪便标本采取、保存 （甘油保存液）、送检 （（一））分离培养分离培养 （（分区划线接种分区划线接种）） 革兰染色 （二）分离培养（分区划线 氧化酶试验 接种） 肉汤接种肉汤接种 （（增菌增菌）） （三）接种生化反应条，药敏试验 （（四））结果观察察 分区划线接种分区划线接种 PiPinkk llawn 革兰染色操作步骤： 水 G+ 洗洗 水水 水洗 洗 涂片涂片 结晶紫结晶紫 碘液碘液 G- 固定 初染10 s 媒染10 s 脱色剂 番红/沙黄 1010-20s20s 复染10s 肉汤接种过程肉汤接种过程 （三）生化反应，药敏试验（三）生化反应，药敏试验 1.1.生化反应：生化反应：  细菌混悬液制备：细菌混悬液制备： 从培养好的肉汤中用从培养好的肉汤中用从培养好的肉汤中用从培养好的肉汤中用接种环取接种环取接种环取接种环取2222--3333环菌至环菌至环菌至环菌至3ml3ml3ml3ml无无无无 菌生理盐水菌生理盐水中混匀，（中混匀，（550nm550nm比色比色ODOD值为值为 0000..125125125125 －－0000.））））之间之间之间之间 ，，备用备用备用备用  试验条的准备试验条的准备试验条的准备试验条的准备 ：： 试验条接种前需试验条接种前需37℃37℃孵育平衡孵育平衡  试验条的接种试验条的接种试验条的接种试验条的接种 ：： API10SAPI10SAPI10SAPI10S生化反应条生化反应条生化反应条生化反应条  鉴定革兰阴性杆菌鉴定革兰阴性杆菌 的常规方法的常规方法的常规方法的常规方法，，能鉴能鉴能鉴能鉴 定定4949种临床上常遇种临床上常遇 到的革兰阴性杆菌到的革兰阴性杆菌到的革兰阴性杆菌到的革兰阴性杆菌。。 IIII.. 去除生化反应条去除生化反应条去除生化反应条去除生化反应条 ，，，，在反应槽底部加入在反应槽底部加入在反应槽底部加入在反应槽底部加入3ml3ml3ml3ml蒸馏蒸馏蒸馏蒸馏 水保证培养湿度水保证培养湿度;; IIIIIIII.. 在反应条上根据标识进行加样在反应条上根据标识进行加样在反应条上根据标识进行加样在反应条上根据标识进行加样 ：：：： 用枪头在试验名称用枪头在试验名称未作标识未作标识的在试验杯中加的在试验杯中加一一 半半半半菌液菌液菌液菌液 ；；；； 有有下划线下划线的加的加一半一半菌液后用石蜡液加满封闭；菌液后用石蜡液加满封闭； 有有有有方框方框方框方框的的的的加满加满加满加满菌液菌液菌液菌液;;;; III.III. 加样后将生化反应槽盖上放入加样后将生化反应槽盖上放入37℃37