2012级全日制分生作业生物分子的分离纯化与PCR技术.docVIP

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2012级全日制分生作业生物分子的分离纯化与PCR技术

生物分子的分离纯化 聚合酶链反应 一、名解 SDS(十二烷基磺酸钠,Sodium dodecyl sulfate)使DNA 与蛋白质分离,在高温(55~65℃)条件下裂解细胞,使染色体离析,蛋白变性,释放出核酸,然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉 淀,离心后除去沉淀,上清液中的DNA用酚/氯仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。 凝胶过滤层析:又称排阻层析或分子筛方法,主要是根据蛋白质的大小和形状,即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。也叫做分子排阻层析。一种利用带孔凝胶珠作基质,按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。一般是大分子先流出来,小分子后流出来。又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同 荧光域值:一般将 PCR反应前 15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光域值是PCR3—15个循环荧光信号标准的10倍,荧光域值设定在PCR扩增的指数期。 退火:DNA热变性后,将温度缓慢冷却,并维持在比Tm值低25 ~35时,即可复性,该过程通常称为退火。 二、问答什么原因易引起DNA降解,该如何解决? 简述PCR技术的基本原理PCR实验中 5、简述实时荧光定量PCR定量的基本原理? 答:所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 121001068 张亚培 临床检验诊断学

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