幽门螺杆菌相关胃癌基因差异表达谱的探究.pdf

摘要 我国胃癌的发生率在各类恶性肿瘤中位居第二，是严重危害人民 身体健康的疾病。20世纪80年代以来，在人群中具有较高感染率的幽 行病学证实，Hp慢性感染是导致胃癌的重要危险因素之一，与胃癌的 发生发展密切相关，感染人群患胃癌的风险比非感染者高4倍。大多 数研究表明在“慢性胃炎一胃黏膜萎缩一肠化生一异型增生一胃癌 998年Watanabe等首次报 这一癌变模式中，Hp可能起着先导作用。1 道Hp感染的蒙古沙土鼠可发生胃癌，这是Hp感染可诱发胃癌的直接 证据。1994年，世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)正式将Hp 列为胃癌的I类致癌原。但Hp引起胄癌的机制尚未完全阐明。 胃癌的发生是一个多病因、多阶段的过程，感染Hp后，其结局可 能发生慢性胃炎，也可能发展为胃癌。提示不同的菌株可能对胃黏膜 上皮细胞产生不同的影响，导致不同程度的疾病发生。 本实验选用临床分离自胃癌、胃炎患者的菌株各lO例分别和 GES．1细胞以不同浓度比例共培养，12h、24h和48h后分别收获细胞， 进行MTT和流式细胞仪检测。结果显示不同来源的Hp菌株对GES．1 细胞在增殖方面的影响具显著性差异，低浓度菌液可不同程度地促进 细胞增殖，高浓度菌液则抑制细胞增殖活性，并且随着时间延长，低 浓度菌液促细胞增殖作用逐渐增强，高浓度菌液对细胞增殖的抑制作 用也越发明显。不同疾病来源的Hp菌株均会引起胃黏膜上皮细胞凋亡 率增加，但组间差异无显著性。随着时间的延长和细菌浓度的提高， Hp菌株促胃黏膜上皮细胞凋亡的影响越发显著。 分别挑选出对GES．1细胞的增殖影响最显著和最小的两株Hp菌株， 分别和GES．1细胞共培养，收获细胞后提取RNA产物与全基因组表达谱 芯片杂交后进行统计分析。结果显示Hp感染GES．1细胞后引起胃黏膜 上皮细胞基因表达谱广泛地改变，这些差异表达基因与原癌基因与抑 癌基因的激活或失活、细胞周期、细胞骨架和运动、细胞凋亡、DNA 的合成、转录、细胞信号、蛋白质的翻译、物质和能量代谢等过程有 关。筛选出一些与肿瘤的发生发展密切相关的基因，如TRAFl、 表达验证和生物学功能研究提供了新的线索。 在基因芯片的结果中挑选出差异性较大且科研意义较高、目前在 挑选出的对GES．1细胞的增殖影响最显著和最小的两株Hp菌株，分别 和GES．1细胞共培养，用空白组进行对照，共分为对照组、胃炎组和胃 癌组，共培养24dx时后。收获细胞提取RNA产物，逆转录后得到cDNA， 组中的表达依次增强，与基因芯片结果一致。 利用取自于临床的伴Hp感染的慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎(病 检示肠上皮化生、不典型增生)及胃癌患者的标本进行免疫组化检测。 结果显示TRAF1和HDAC6在慢性浅表性胃炎、肠上皮化生、不典型增 染导致慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎、胃癌的发生发展过程，为阐明 Hp致胃癌发生的分子机制以及胃癌新的分子标记物提供了新的线索。 关键词 幽门螺杆菌，胃癌，人胃上皮细胞，表达谱芯片，免疫组化 II ABSTRACT in Theincidenceof canceriSinthesecond various gastric place inChina．ItiSaseriousharmtothehealthof 80s cancers people．Since ofthe20m relationof cancerand infection century,the gastric H．pylori chronic hasreceivedextensive