外周型苯二氮卓受体转运蛋白(TSPO)在小胶质细胞炎症反应中的作用和机制的探讨.pdf

外周型苯二氮卓受体转运蛋白(TSPo)在小胶 质细胞炎症反应中的作用及机制的探讨 博士研究生：苏新辉 导 师：王玮教授 吴华教授 中文摘要 背景与意义 小胶质细胞是脑中最重要的免疫效应细胞。小胶质细胞激活介导的脑内慢 性炎症反应在许多种神经系统疾病的病理进程中扮演极其重要角色，这些神经 系统疾病包括脑肿瘤、脑缺血、脑外伤、脑感染、神经系统变性疾病等等。在 神经系统疾病过程中，小胶质细胞扮演的角色不仅仅是“反应性增生一简单地 对死亡细胞的残骸进行清除，而是直接参与了疾病病理过程的启动、进展和最 后结局。激活的小胶质细胞会产生过量的对神经元有损害作用细胞因子，如一 B(IL．1 氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子吨(TNF．a)、白细胞介素一1 B)、白细胞 介素-6(IL．6)和自由基等多种物质，引起各种不同程度的炎症反应和细胞凋亡 构成的“病理级联”变化，最终导致神经元的损伤或死亡。基于上述发现，以 抑制小胶质细胞的激活过程为靶点，延缓神经变性疾病的进程已经成为防治神 经退行性疾病的一个重要策略，是近年来神经生物学和神经病学研究的热点。 18 外周型苯二氮卓受体转运蛋白[TSPOkDa，即异喹啉结合点，曾称为外 周型苯二氮卓受体(PBR)]在中枢神经系统中主要分布在小胶质细胞线粒体外膜， 在神经元分布很少。最近研究表明，TSPO在静息小胶质细胞中的表达很低，而 在激活的小胶质细胞中，TSPO呈现明显高表达，这说明了TSPO可能具有调节 ll 小胶质细胞功能状态的作用。同时，TSPO配体PK195和R05．-4864(PKll195 称为PBR的拮抗剂，R05-4864称为PBR激动剂)良好的外周抗炎作用在近年 3 备受关注，初步的研究表明TSPO配体也具有神经保护作用。但TSPO表达与小 胶质细胞功能状态的关系目前尚未明确，TSPO表达与小胶质细胞炎症反应关系 又是怎样?TSPO配体是否具有抑制中枢神经系统中小胶质细胞的激活作用和 减少活化小胶质细胞释放炎症因子?如果有，通过何种机制?等等。这些问题在 近年来备受关注，亟待阐明。 研究目的 1．研究TSPO表达与小胶质细胞炎症反应关系。 2．研究TSPO配体对小胶质细胞的激活抑制作用。 3．研究TSPO基因在小胶质细胞炎症反应中的作用。 4．研究TSPO配体抑Nd,胶质细胞活化的作用机制。 研究内容 1．LPS对小胶质细胞分泌炎症因子的影响。 2．TSPO在LPS诱导小胶质细胞活化中的表达。 3．TSPO配体对LPS诱导小胶质细胞分泌炎症因子的影响。 4．沉默TSPO基因对LPS诱导小胶质细胞分泌炎症因子的影响。 5．在TSPO基因沉默下TSPO配体对LPS诱导小胶质细胞分泌炎症因子的影响。 6．TSPO配体抑带IJLPS诱导小胶质细胞分泌炎症因子的信号传导通路的研究。 7．TSPO配体对LPS诱导小胶质细胞分泌炎症因子mRNA稳定性的影响。 研究方法 h，2 min，l 1．在BV_2小胶质细胞培养体系上，加入LPS(100ng／m1)分别于30 h，4h，6h，12h，24 h后用倒置相差显微镜观察BV-2细胞的生长分布状况 及形态学改变，用ELISA测定BV．2细胞释放TNF-位、IL—lJ3和IL-6种细胞因 子水平。 4 2．在BV-2细胞培养体系上，加入LPS(100