直接计数法原理：总菌数测定是计算微生物的直接方法可分为直接.DOC

直接計數法 原理： 　　總菌數測定是計算微生物的直接方法，可分為直接計數及間接計數二類。其中直接計數是利用不同的計數器或載玻片（有界線或一般載玻片）在顯微鏡下直接觀察，計算微生物細胞的總數量。此方法優點為方便、快速、節省時間；缺點是無法辨識是否為微生物或只是玻片上看不清楚的黑影，部分微生物未能沈降或為死亡狀態，以肉眼觀察計數的誤差極大。直接計數的目的為計數並非觀察，所以只需能辨別出菌體即可。 　　以下介紹直接計數的三種方法： 血球計數法： 　　　　　　　　血球計數器為直接計數法中最常用的方法，計數器上凹槽有一邊長1mm的正方形格子，該格內分為個大方格５），每一大方格再細分小方格４），因此每小方格的邊長為。在高度方面蓋上蓋玻片後，玻片與計數器的間距恰好為，故每小格的體積。實驗時滴入菌液蓋上蓋玻片，使充滿計數器凹槽中，接著以顯微鏡觀察計算小方格內菌體數量，即可樣品之總菌數。有界線載玻片是在載玻片的表面上刻有間隔的平行線，其實驗首先以滴管吸取的待測水樣滴於載玻片上並蓋上蓋玻片。接著計算共進行25次）在顯微鏡上放大，沿線條出現每種微生物的個數。若有群體出現的微生物，每個相連的群體當成一個個體計算。廢汙水處理場或汙染現場其設備及操作條件較實驗室差，不一定能以上述方法進行計數，有時為了快速地推估微生物數量，可利用簡略方法，即於光學顯微鏡放置一般載玻片進行觀察計數。唯進行時，應將佈滿整個蓋玻片的微生物全部計數，並重複2~3次。此法因載玻片上無格線或標示，很容易計算錯誤。培養液中，均勻搖晃。 將酵母菌液進行連續10倍稀釋。 量測吸光值，利用UV-vis spectrophotometer 測菌液吸光值，放入原液進行歸零校正，放入稀釋之菌液進行吸光值測定，吸光值最好介於2 ~ 0.01之間，如果未介於應捨棄不用。 以血球計數器算菌數，吸取稀釋好之菌液，滴於血球計數器之中央再蓋上專用蓋波片。 以顯微鏡觀察計算菌數 實驗數據 吸光值與菌數： 稀釋倍數 吸光值 菌數 原液 1.867 0.758 173 0.094 27 0.015 22 0.007 1 0.001 1 吸光值與菌數： 原液菌數： ５４ ６８ ７２ ６４ ７３ ６７ ８２ ６８ ７５ ７１ ７３ ７０ ６６ ６３ ６９ ６５ 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　總菌數：１１００個 問題與討論 １．說明以直接計數法（血球計數器）進行微生物計數之原理與優缺點為何？ 　一．血球計數器為直接計數法中最常用的方法，計數器上凹槽有一邊長1mm的正方形格子，該格內分為個大方格５），每一大方格再細分小方格４），因此每小方格的邊長為。在高度方面蓋上蓋玻片後，玻片與計數器的間距恰好為，故每小格的體積。實驗時滴入菌液蓋上蓋玻片，使充滿計數器凹槽中，接著以顯微鏡觀察計算小方格內菌體數量，即可樣品之總菌數。。 　　　　二．每毫升樣品的總菌數： 　　　　　　　。 心得 　　這一次的實驗，主要就是稀釋後的菌液它所得吸光值和菌數，吸光值還是跟之前的一樣先放入二段水來進行歸零，然後再放入待測的菌液，而菌數的方面就跟以前所用的方法不一樣了，是使用血球計數器，在顯微鏡下直接用看的並數出有多少個菌，這個方法比較省時不用再等到隔天才來看菌數，有比較方便。 　第七組　４９７０Ｎ０６４　陳樵諺 　　這次是做血球計數器，說簡單很簡單，說難就是會看到眼花撩亂，稀釋次數越少其實沒幾顆甚至沒有半個，但是到了原液，有好幾百個甚至破千，這誰受的了阿，這次實驗作疲累的是眼睛，之後我們等很久，終於換我們這組釀酒了，釀了好久喔，這麼一桶，怎麼才這麼一小罐呢，拿回去給媽媽煮菜。 第七組　４９７０Ｎ０１１　陳楷勝 　　本次的實驗又是跟顯微鏡有關，只是不同於以往是用顯微鏡看菌，然後畫出圖形，這次則是利用血球計數器來看數量，是個很不一樣的實驗，一開始我們還抓不出頭緒是要怎麼看，只看到一堆格子看的眼都花了，後來經過老師的指導才了解該如何去看那些令人眼花的小方格，可是當我們從稀釋倍數高依序往低看時，那數量竟然是越來越多的驚人，數的我頭都花了。 第七組　４９７０Ｎ００１　黃志豪