云南中医学院2012毕业生论文金匮肾气片中齐墩果酸的薄层色谱鉴别研究.docVIP

2012届攻读学士学位本科生毕业论文 金匮肾气片中齐墩果酸的薄层色谱鉴别研究 学 院 中 药 学 院 学生姓名 专 业 中药学 ___________ 实习单位 昆明中药厂有限公司 导师姓名 ____ 二零一一年十月二十七日 金匮肾气片中齐墩果酸薄层色谱鉴别研究 实习学生： 指导教师： 摘 要： 目的:研究金匮肾气片中齐墩果酸的薄层色谱鉴别新方法。方法:采用薄层色谱法对金匮肾气片中齐墩果酸进行定性鉴别。结果：建立了金匮肾气片中齐墩果酸的薄层鉴别新方法，寻找了最佳的水解酸度，改善了齐墩果酸的薄层鉴别。结论：所建立的方法简便，专属性强，重现性好，阴性无干扰，适用于金匮肾气片中齐墩果酸的鉴别。 关键词：金匮肾气片；齐墩果酸；薄层色谱鉴别 金匮肾气片收载于《国家中成药标准汇编》内科 肾系分册。由附子，桂枝，地黄，茯苓，山药，泽泻，牡丹皮，牛膝，车前子，山茱萸十味药材组成，具有温补肾阳，化气行水的功效。现行标准中采用薄层色谱法鉴别齐墩果酸以对牛膝进行检识。在实际检验中，由于供试品制备繁琐，费时，影响实验进程，进而影响生产效益。 本实验对齐墩果酸的提取方法进行了全面深入的研究和优化，在供试品的制备时，分析目前报道齐墩果酸的提取方法，进行了大量对比研究，考虑了指标成分的提取率以及其他成分对定性鉴别的影响，考察了不同水解酸度，不同萃取次数对所检成分的影响。摸索出一套合理的提取方法，从重现性、专属性和耐用性的角度对该方法进行了方法学验证，所建立的提取分离方法具有操作简便、结果准确，重现性好等优点，为金匮肾气片中齐墩果酸的定性鉴别及质量控制提供了科学依据。 1．试验材料 1.1 样品：金匮肾气片：昆明中药厂有限公司制备，10个不同批号（薄膜衣片）：080604、081204、090114、090719、100148、101018、110822、110823、110824、110825。 1.2 仪器：800型离心沉淀器（上海手术器械十厂）；电热套：铺板器。电热鼓风干燥器（101A-2E型）（上海实验仪器厂有限公司） 1.3 材料：硅胶H板（100×200mm，0.25mm；青岛海洋化工厂分厂）；自制硅胶H板。 1.4 对照品：齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110709-200505） 1.5 阴性对照：阴性对照样品由自己制备。 1.6 试剂：乙醇（分析纯，重庆川东化工集团）；石油醚（60℃-90℃）（分析纯，重庆川东化工集团）；盐酸（分析纯，重庆川东化工集团）；磷钼酸（国药集团化学试剂有限公司）。 2．试验方法与结果 2.1 供试品溶液制备方法比较 2.1.1 国家中成药标准汇编方法供试品溶液的制备 取本品20片，去包衣，研细，加水40ml微沸使溶解，离心，取上清液浓缩至近干，加乙醇20ml微热搅拌使溶解，倾出上清液，加盐酸2ml，加热回流2小时，浓缩至5ml，加水10ml，用石油醚（60～90℃）20ml振摇提取，分取石油醚液，蒸干残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。 2.1.2 改进法供试品溶液的制备 取本品20片，去包衣，研细，加乙醇20ml使溶解，加热回流40min，滤过，滤液浓缩至约10ml，加盐酸1ml，加热回流1小时，浓缩至约5ml，加水10ml，用石油醚（60～90℃）振摇提取两次，每次10ml，分取石油醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。 2.2 对照品溶液及阴性对照品溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg齐墩果酸的对照品溶液，作为对照品溶液。 2.2.2 缺牛膝阴性对照溶液的制备 原方法去除牛膝后，按比例配方，山药与山茱萸混合粉碎成细粉，桂枝粉碎成粗粉，加90%乙醇回流提取1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，备用；药渣与除牡丹皮外的其余六味，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次、第三次各1.5小时，合并煎液，滤过。滤液浓缩至相对密度为1.28～1.30（60℃）的清膏，加入山药、山茱萸细粉，混匀，干燥，即得阴性样品，取5g，参照上述参照上述供试品溶液制备方法制备，即得阴性样品溶液。 2.2.3 薄层色谱条件及展开 照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VIB试验，吸取对照品溶液5ul，供试品溶液和阴性对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷—甲醇（40:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液为显色剂，在105℃加热至斑点显色清晰。 2.2.4 结果 由薄层层析图可以明显观察到：国家中成药标准汇编法与改进法制备的供试品色谱，与