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第三章 灭活剂、保护剂、与免疫增强剂 第一节 灭活剂 一、灭活与灭活剂 （一）灭活：杀死病原微生物，但不影响免疫原性；其次是破坏血清的补体，以免干扰血清学反应结果。 灭活剂：灭活微生物的化学试剂。 灭活方法：物理灭活：加热、超声波及射线灭活微生物，此方法免疫原性易破坏，现很少使用（血清56°C半小时灭活补体用此方法）。 化学灭活：用化学试剂将病原微生物杀死，此方法经常使用。 二、常用的灭活剂种类和原理 （一）甲醛：是最古老常用的灭活剂，现在我国用的26种灭活疫苗，均以甲醛为灭活剂。 性质：甲醛为刺鼻的气体，水溶液叫福尔马林，浓度为36%-40%。10°C以下易聚合成三聚甲醛或多聚甲醛，为白色沉淀。 原理：甲醛的醛基起灭活作用，可使 蛋白质的氨基→羟甲基胺 羧基→亚甲基二醇单酯 羟基→羟甲基酚 巯基→硫代亚甲基二醇 浓度：需氧菌甲醛浓度到0、1%--0、2%. 厌氧菌0、4%--0、8%. 病毒0、05%--0、4%. 原则是浓度低，时间短，温度低可以灭活细菌，尽量减少破坏抗原（通常加入量，以甲醛含量量计算，折合福尔马林浓度）。 （二）烷化剂：将烷基引入，形成烷基取代物，使微生物变性死亡。 原理：主要破坏病毒的核酸，作用于A：G碱基，引起DNA单链断裂或双链铰连。 此类常用于病毒灭活，种类有AEI—N-乙酰乙烯亚胺，加入浓度到0、05%。 BEI—二乙烯亚胺，浓度0、02%；EEI—2—乙基乙烯亚胺，GDA—缩水甘油醛。 灭活后加硫代硫酸钠可终止灭活，防止抗原损失。 保存：AEI，0--4°C一年，--20°C二年；BEI 0--4°C保存一个月。 （三）苯酚（石碳酸）人类用的 第一个消毒药，具有特殊气味的无色结晶，易潮解成水溶液，与光、氧后颜色变紫色。 原理：蛋白质变性以及抑制氧化脱氢酶，芽孢和病毒对它抵抗力强。 灭活浓度：抑菌作用是0、2—0、5%（血清防腐），杀菌是1%，杀葡萄球菌是3%。 消毒常用它的衍生物，来苏儿（甲酚皂）3—5%浓度，特殊气味，覆盖其他气味，也是医院常用的。 (Joseph Lister,1827~1912)首创用石炭酸喷洒手术室和煮沸手术用具以防术后感染，为防腐、消毒，以及无菌操作奠定了基础。 （四）结晶紫（龙胆紫），也叫紫药水，碱性染料，也叫甲紫或甲基青莲，化学名，六甲基副玫瑰苯胺。 原理：碱性阳离子可结合细菌阴离子羧基；干扰细胞壁粘肽合成；常作用于革兰氏阳性菌。 生物制品的应用有猪瘟结晶紫疫苗，鸡白痢染色抗原。 （五）β—丙酰内酯 良好病毒灭活剂，性状是无色有气味液体，易潮解和高温失效，5°C密封保存好，现主要用于狂犬灭活苗。 另还有防治细菌霉菌生长的防腐剂：硫柳汞（乙基汞硫代水杨酸钠），叠氮钠（NaN3） 它们使用浓度0、01-0、02%。可防止血清腐败。 三、影响灭活作用的因素 （一）药物的特异性：酚类不能杀灭真菌和病毒，阳离子的结晶紫，主要作用于G+菌。 （二）微生物的种类和特异性：G+菌和G-菌对药物敏感不一样，繁殖体和芽孢对药物敏感也不一样。 （三）药物浓度：浓度愈大，灭活越快，抗原也损失大；但是，95%酒精没75%酒精杀灭细菌好。 （四）温度：温度与灭活成正比，每升高10度，金属类杀菌作用增加2—5倍。但高温超过40°C，抗原也损失大。 （五）时间：灭活时间与温度和浓度成反比，即灭活杀菌 长，温度旧低，浓度也 低，就可以杀灭细菌。 （六）pH：碱性快，酸性慢，酸性环境对 抗原保护好。 （七）有机物存在：环境的 有机物减低灭活的效果，微生物也是有机物。 四、灭活疫苗时的注意事项 2人参加灭活，注意药品名和量，灭活后标记。 37°C灭活一天后，接种适宜培养基—无菌检查。 动物试验，灭活苗制成后，注射小白鼠0、2ml，两只，观察3天。 使用试验：用户可先注射1-2头，观察1—2天，看有无过敏，应激等反应，证明安全，才全群使用。 思考题： 什么叫灭活和灭火剂？ 灭活剂的种类有哪些？ 影响灭活的因素是什么？ 灭活的注意事项有哪些？ 第二节 保护剂 保护剂也叫稳定剂，是防止微生物在冻干过程中受到破坏。 按作用原理分两类： 渗透剂：能渗入细胞，使胞内外渗透压平衡，防止慢冻时损伤细胞。有甘油，蔗糖，二甲基亚砜。 非渗透剂：防止细胞内外物质交换在速冻时保护细胞。有 蛋白质，聚乙烯吡咯酮。 按保护剂分子量分类： 低分子量保护剂：糖、氨基酸类。 高分子量保护剂：脱脂牛奶、明胶。 按化学性质分类： 复合物：脱脂牛奶，血清。 糖类：蔗糖、乳糖。 盐类：乳酸