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液相色谱-质谱联用技术原理与应用 液相色谱技术（LC） 质谱技术（MS） 应用 液相色谱(Liquid Chromatography) 技术 一种分离和检测（分析）的技术 能够把液体混合物中的不同组分根据在色谱柱中保留时间不同进行分离,检测及收集 色谱法分离原理 LC给出的信息？ 可解决的问题： 定性：保留时间 定量：峰面积，峰高 如何完成分离和分析功能？ 检测器：多种 LC问题： 1 未完全分离？ 2 定性，结构信息？ 3 灵敏度？ MS（Mass Spectrometry ）质谱法 利用多种离子化技术，将物质分子转化为离子，按其质荷比(m/z : m质量，z电荷数 )的差异分离测定，从而进行物质成分和结构分析的方法。 质谱技术： 质谱分析过程：样品通过进样系统进入离子源，由于结构性质不同而电离为各种不同质荷比（m/z）的分子离子和碎片离子，而后，带有样品信息的离子碎片被加速进入质量分析器，不同的离子在质量分析器中被分离并按质荷比大小依次抵达检测器，经纪录即得到按不同质荷比排列的离子质量谱，也就是质谱 (mass spectrum)。 质谱：按离子的质荷比的大小依次排列形成的图谱 质谱给出的信息？ LC-MS联用技术给出的信息？ LC-MS可解决的问题： 定性：结构信息，保留时间 定量：峰面积，峰高 可检测极微量的物质 如何完成工作？ 1 电喷雾电离(ESI) LC/MS 2 大气压化学电离(APCI) LC/MS 3 基质辅助激光解吸电离(MALDI) 1 电子轰击电离(EI) 2 化学电离(CI) 3 快原子/离子轰击(FAB/SIMS )离子源 4 等离子体解吸(PD) 5 场致电离 -- Field ionization 6 火花放电 -- Spark source 7 激光电离 -- Laser ionization (LIMS) 8 共振电离—Resonance ionization(RIMS) 9 热电离 -- Thermal ionization (TIMS) ESI与APCI 离子源的选择 ESI 适合范围广:分析离子型/极性化合物、难挥发或热不稳定性化合物 易形成多电荷离子，可以分析高分子量化合物 灵敏度高 离子化受溶剂、流速的影响 不同离子源可能都有响应，但响应值不同 应用 制药：合成过程中中间体、成品的结构鉴定，杂质分析 天然药物与中药分析：结构鉴定，质谱规律，中药药效物质基础 药物代谢药物动力学：药动学 药物代谢物寻找 代谢组学 蛋白组学（生物大分子分析） 烟草 食品分析 公安毒物检查 体育兴奋剂检测 中药中非法添加化学药 新生儿筛查 液质联用分析美伐他汀的有关物质 Zorbax SB-C18色谱柱＆保护柱 流动相：(A)乙腈-(B)0.3%醋酸水溶液 0-20 min ：A 25%-30%，B 75%-70% 20-37 min：A 30％-50％，B 70％-50％ 37-45 min：A 80%，B 20% 流速：1.0 ml·min-1 检测波长：275 nm 全波长扫描范围：190-400 nm 柱温：40℃ ESI源 负离子检测 扫描范围：80-1000 m/z 鞘气流：50 arb 辅助气流：15 arb 源电压：5.00 kV 毛细管温度：350℃ 毛细管电压：-12.00 V 管透镜补偿电压：-10.00 V 液质联用分析中药降糖制剂中掺入的化学药物 LC-MS/MS技术在法庭科学中的应用 毒品/滥用药物：可卡因、海洛因、吗啡、摇头丸、迷幻药等等 2001年1-6月缴获海洛因6201千克、鸦片1927千克、冰毒2970千克、摇头丸64万粒、度冷丁1400支、咖啡因80千克、罂粟壳40吨、易制毒化学品72吨 毒物：鼠药、农药、工业毒物、药物毒物、蛇／蝎／蜂毒、河豚毒素及其它海洋生物毒素、植物毒素等等 爆炸物：硝化甘油、OCTOGEN、HMX、EGDN、HEXOGEN、RDX、NG、TETRYL、DNT和PETN等等 其它化合物：案发现场遗物如油漆、血迹、高聚物等 蛋白质和多肽的分析 分子量测定 肽谱测定 肽及蛋白质序列测定 蛋白质定量 巯基和二硫键定位 蛋白质翻译后修饰分析 抗原决定部位指认 生物分子相互作用及非共价复合物分析 髓母细胞瘤与室管膜瘤患者脑脊液 比较蛋白质组学研究 吉林大学，2011年医学博士论文 应用比较蛋白质组学技术，对髓母细胞瘤脑脊液、室管膜瘤脑脊液及正常对照组脑脊液进行比较蛋白质组学研究，分离、鉴定差异表达蛋白质，以期为髓母细胞瘤、室管膜瘤脑