方法开发讲座–客户提问与回答整理-Waters.PDFVIP

0510方法开发讲座 – 客户提问与回答整理 1. Auto Blend Plus 技術適用所有Waters HPLC 系統嗎? 答：目前ACQUITY Arc ，ACQUITY H-Class/H-Class Bio带有此项技术。 2. 方法开发一开始是否应该考虑到色谱柱宽pH耐受性的特点？ 答：是的！除非目标药物及其杂质完全是中性化合物，否则pH对它们的反相保留、峰形与分离度影响最大。 一定要在方法伊始就对pH进行筛查。筛查pH3, 5, 8, 10 ，能够较为全面的覆盖低-高pH值，对色谱柱也会 有化学耐受性的要求。好在，有完全成熟的色谱柱产品（自2005年）可以承担这个工作。 3. 2.5um色谱柱在Arc系统上的压力如何？ 答：一般来说色谱柱在LC系统的压力多少影响因素较多，如色谱柱粒径、柱长、流动相组成、流速、温度 等都会产生影响。针对老师提及的 “2.5um色谱柱在Arc系统上的压力 “ 如柱长在10cm左右，常规HPLC 条件，流速在1.0ml/min ，甲醇体系压力应该在2000psi ～3000psi左右 4. Auto blend plus重现性如何（不同人员配置流动相结果的重现性）？ 答：采用Auto Blend Plus技术，实验人员只需配制酸碱母液，随后即可根据需要在梯度表中设置所需的 pH 条件进行测试（方法开发过程中所能尝试的pH 范围取决于酸碱母液p H缓冲范围）。通过这个技术， 减少了方法开发过程中pH筛选所需要反复手动配制流动相的过程。因此可以减少由于不同人员配制流动相 所带来的人为误差，提高结果的重现性。 5. 我是QC分析员，对于Chen Jing老师的PPT ，能具体讲一下柱子的适用性吗？ 答：简要说明如下：  XBridge C18 ——耐受性最宽（pH 1-12 ），通用性强，很适合作为方法开发色谱柱全面筛选pH ； 或者，对于既有方法流动相比较苛刻的项目，例如：流动相pH7、含有三乙胺、高浓度磷酸盐、柱 温较高、等等。  XBridge ShieldRP18 ——耐受性次之（pH 2-11 ），通用性强，还兼容100%水相。可作为方法开 发时，XBridge C18之后的第二根柱；或者，既有方法要求高水相比例、同时比较苛刻的（同上）。  XSelect CSH C18 ——耐受性宽（pH 1-11 ），表面带电杂化颗粒，对碱性药物或肽有独特的峰形与 载量的优势，在甲酸体系下尤为明显。  XSelect HSS T3 ——特色硅胶C18柱（pH 2-8 ），大大增强对极性分子的反相保留能力，同时还是 “平衡柱”——适用于极性范围跨度大的项目。  CORTECS C18——实心核硅胶颗粒，其中，2.7um 4.6x150mm柱压可兼容常规HPLC系统，并提供 最高柱效。特别适用于原料药、生产中控、以及清洁验证中的分析提速。  CORTECS C18+ —— 同上，但同时有表面带电技术，对碱性药物或肽有独特的峰形与载量的优势。  XBridge苯基柱 ——化学耐受性最强的苯基柱（pH 1-12 ）。对芳香或平面结构化合物有优势。对 于既有方法用苯基柱，如流动相条件容易造成苯基柱键合相流失的（苯基流失峰可见），可优先考虑 XBridge苯基柱。  XSelect HSS PFP ——硅胶基质全氟苯基柱。对芳香或平面结构化合物有优势。  XSelect CSH FP ——表面带电杂化颗粒基质氟苯基柱。对于碱性的芳香/平面结构化合物有优势。 更详细的色谱柱特色与优势应用，请参见沃特世UPLC/HPLC色谱柱选择卡。 6. 请问平衡一根色谱柱通常需要多长时间？多少柱体积? 答：常规反相色谱柱（不含离子对试剂时）一般5 ～10倍柱体积初次平衡，3 ～5倍柱体积梯度间再平衡。 时 间，则是柱体积除以所采用的流速得到的数值。 7. 想問生物鹼(Alkaloid)若有同分異構物，會建議使用鹼性條件分析嗎? 在column選擇上較推薦離子交 換column還是chiral column? 答： 推荐了解Waters的UPCC技术 ，是同分异构体分离分析的优势技术。如果要在目前的仪器平台上，首 推UPLC或UHPLC ，C18柱、苯基柱、氟苯基柱，后两者主要是对于芳香类/平面结构类化合物而言，色谱 柱的柱效水平配置一定要高（拼的就是柱效）。生物碱，在较高pH条件下保留增强，的确对同系物的分离 可能有利，值得检查高pH条件。离子交换柱要看同分异构体是否是