保肺定喘汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠VEGF表达影响.docVIP

保肺定喘汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠VEGF表达影响摘要：目的：观察保肺定喘汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法：模型组、保肺定喘汤预防组和治疗组采用慢性烟熏和气道内2次滴入脂多糖方法建立COPD大鼠模型。保肺定喘汤预防组和治疗组分别在造模前7天和造模第29天开始胃饲受试药物。采用免疫组化和逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF蛋白质和mRNA的表达。结果：造模3组具有COPD气道重构等病理改变。与正常对照组相比，模型组在中、小气道和肺动脉VEGF蛋白质表达显著增高；支气管肺组织VEGF mRNA表达也显著增高(P均＜0.01)。保肺定喘汤预防和治疗两组，VEGF蛋白质和mRNA的表达则明显低于模型组(P＜0.01-0.05)。结论：①VEGF在COPD大鼠气道重构中具有重要的作用。②中药保肺定喘汤可以减轻气道重构，其机制可能与调节VEGF在气道与肺动脉等的表达有关。 关键词：COPD；气道重构；血管内皮生长因子；保肺定喘汤 中图分类号：R-33 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)08-1624-04 近年来国外对血管内皮生长因子(VEGF)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重构和血管重构中的病理机制中的作用日益重视。国内对低氧大鼠肺内VEGF表达与肺血管重建的关系已有研究。但对其在气道重构方面的作用以及药物干预研究尚未见报道。 本实验首在观察保肺定喘汤对COPD大鼠模型VEGF表达的影响以及对气道结构变化的干预作用，以深化探讨名老中医经验方作用机制。 1　材料与方法 1．1　材料 1．1．1　实验动物　SD健康雄性大鼠(清洁级)由浙江大学医学院动物中心提供。 1．1．2　受试药物　保肺定喘汤由浙江省中医院中药制剂室制成流浸膏，含生药3.1g/mL，批号 1．1．3　对照药物 生理盐水由石家庄四药股份有限公司生产，规格：500mL/瓶，批号 1．1．4　主要试剂　脂多糖(LPS)购自美国Sigma公司；绿西湖香烟(每支含烟碱量为15m8，尼古丁为1.0mg)为杭州市卷烟厂产品；VEGF免疫组化试剂盒购自英国Smm Craz生物有限公司；VEGF引物：上游引物5 ‘CCG GGC TGCCTC GCA GTC3’，下游引物5’TCA CCG CCT TGG CTTGTC AC 3’，β-actin上游引物5 ‘CCTTCT ACA ATGAGC TGC GTG3B3，下游引物5’TCATGA GGTAGT CTGTCA GG3’，均购自上海生物工程有限公司；Marker DL2，000为Tadara Biotechnology(Dalian)Co.Ltd产品；dNTP混合液、RNA酶抑制剂、Oligo DT、M-MLV reverse tran-8ciptase(200/mL)购自美国Promega Corporation；Taq酶购自上海生工生物工程公司；TRlzol购自Invitogen公司。 1．1．5　主要仪器与设备　病理图像分析仪Leica Qwinstandard 2.8，德国；DY003078 PCR扩增仪，美国MJ Re-seamh Inc；紫外成像仪，Alpha innotech Corportion；Kodakdigital science软件，日本Kodak公司。 1．2　建立COPD模型和药物干预方法 1．2．1　动物分组　将40只健康雄性SD大鼠(清洁级)，体重(160±20)g，随机分为4组，即正常对照组、模型组、保肺定喘汤预防组和治疗组，每组10只。 1．2．2　COPD模型建立　正常对照组每天在自制吸烟染毒箱内以相同时间呼吸正常空气，并于造模第1、28天每只大鼠气道内滴入0.2mL生理盐水。COPD模型分3组，即模型组、保肺定喘汤预防组和治疗组。3组COPD模型大鼠在自制吸烟染毒箱内被动吸烟30支(绿西湖香烟)，每天2次，每次产隔10h，共70天；造模第1、28天每只大鼠气道内滴入脂多糖(LPS)0.2mL(200μg)，该日内不予以吸烟。正常对照组在气道内滴人生理盐水时死亡3只。模型组、保肺定喘汤预防组和治疗组在气道内滴人LPS时分别死亡3、2、2、只。 1．2．3　药物治疗　保肺定喘汤预防组和治疗组分别从造模前7天、造模第29天开始每日胃饲受试药物9.3g/kg，加生理盐水配制成2mL，相当于临床成人用药量的6倍；正常对照组及模型组每日胃饲2mL的生理盐水。 1．3　标本处理 实验结束后断颈处死大鼠，取右下叶肺组织用10％甲醛固定，分别作HE染色、Masson三色染色和免