Cyclin D1及p16在肥大乳房腺体组织中表达及意义.docVIP

Cyclin D1及p16在肥大乳房腺体组织中表达及意义[摘要]目的:探讨CyclinD1以及p16蛋白在肥大乳房乳腺组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法,检测35例肥大乳房及16例正常体积乳房乳腺组织中cyclinD1及p16蛋白的表达情况及相互联系。结果:35例肥大乳房腺体组织中CyclinD1蛋白阳性表达率51.4%(18/35),16例正常体积乳房标本腺体组织中无一例CyclinD1呈阳性表达(0/16),两组间比较差异有统计学意义(P 1.1.4 正常对照组患者应行病理诊断确诊为正常腺体组织,排除其他病变,回避月经期。术前必须征得患者同意。 1.2 标本来源及分组:所有病例均来自2007年9月～2009年3月间,武汉市协和医院收治的要求行乳房缩小整形术的患者。以及同期收治的乳房体积在正常范围(250～350ml)的行其他乳房手术患者。 1.2.1 肥大乳房组:共35例,年龄13～37岁,平均年龄22.3岁,乳房体积平均值为(852.33±144.20)ml。根据年龄段分为三组:13～20岁,21～30岁,31～37岁。 1.2.2 正常发育乳房组:共16例,年龄15～41岁,平均年龄24岁,乳房平均体积为(261.32±16.51)ml。 两对照组的年龄无统计学差异。 1.3 实验方法及判断标准 1.3.1免疫组织化学染色:采用SP法,主要步骤为:二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水, 高压组织抗原修复,正常山羊血清37℃封闭,滴加羊兔一抗(KIT-0305,羊抗鼠/兔,迈新生物)4℃冰箱孵育过夜,次日分别滴加二抗(Rabbit Anti-Cyclin D1(RMA-0541,福州迈新),P16(Ma远泰生物),DAB显色10～15min,苏木素复染胞核,脱水透明并用中性树胶封片。 1.3.2CD1染色的诊断标准[5]:cyclinD1蛋白表达定位于胞核,胞核呈黄色或棕黄色颗粒着色为阳性细胞,染色结果在高倍镜下,每例样本中随机选择十个视野,每个视野中细胞数不少于500个细胞,利用光密度分析仪来检测阳性细胞的百分率。若细胞的阳性率10%为阳性表达(+),50%为强阳性表达(++)。 1.3.3P16染色的诊断标准[6]:p16蛋白在胞质中的反应性可以被忽略,唯有在胞质背景中的细胞核染色才认为是p16蛋白的表达的证据,染色结果在高倍镜下,每例样本中随机选择十个视野,每个视野中细胞数不少于500个细胞,利用光密度分析仪来检测阳性细胞的百分率。若细胞的阳性率10%为阳性表达(+),10%则说明该样本阳性表达,50%为强阳性表达,10%为阳性表达(+)(图5), CyclinD1与 p16二者的动态平衡是细胞保持正常增殖的一个重要保证, CyclinD1的高表达,p16的缺失或失活都将直接导致细胞发生癌变。研究表明, Cyclin Dl的过量表达和p16的缺失,在多种肿瘤细胞中是同时发生的。王强修等[19]在胃癌组织中发现Cyclin Dl高表达和p16蛋白低表达多同时存在。国外有学者[20]将抗 Cyclin D1抗体和 p16蛋白共同注射至正常的成纤维细胞,比单独注射上述两种蛋白造成的生长抑制更明显。提示这两种异常相联合,使肿瘤细胞获得更大的生长优势。其次在瘢痕,血管瘤等病变中也存在着二者的异常改变。 目前,国内外大多数研究侧重于研究CyclinD1及p16在乳腺肿瘤组织中的表达及临床意义,但对其在乳房肥大中的作用及机制报道甚少。本研究发现,在肥大乳房腺体组织中,同样存在着CyclinD1蛋白的高表达以及p16蛋白的低表达,这种异常表达与年龄分组无相关性,但是,CyclinD1的高表达与p16的低表达之间存在着相关性,说明这两种异常改变同时是乳房肥大的发病因素,且二者存在着某种影响关系。这一结果与Tekeuchid等[21]的研究结果相同。 根据本课题组已有的研究结果,在乳房肥大乳腺组织中,雌激素受体[4]、芳香化酶[22]、表皮细胞生长因子[23]、雌激素受体相关受体[24]等均有表达的异常,但它们之间是否存在联系还有待进一步探究。CyclinD1和p16是细胞增殖周期中重要的分子,二者是许多信号传导通路的关键环节,乳房肥大的发病机制中存在那种信号通路的异常?在遗传学方向,肥大乳房的患者是否存在基因的变异,这些基因变异与临床表现之间有何联系?据已有的研究结果,在乳腺癌和肥大乳房中均存在CyclinD1的异常表达,但至今还没有相关研究明确显示二者之间有何区别。这些问题都有待于进一步的探索。 综上所述,在肥大乳房腺体导管上皮中,CyclinD1蛋白呈高表达,p16蛋白呈低表达,二者的异常变化具有负相关