免疫介导豚鼠脊髓运动神经元损伤的超微结构及钙稳衡改变 observation on ultrastructure and altered calcium homeostasis in the immune-mediated spinal cord motor neuron injury in guinea pigs.pdfVIP

第26卷第2期 电子显微学报 V01．26．No．2 2007年4月 of 2007—04 Joumal CKn憾e日∞订蚰Micm∞opysocie锣 文章编号：1000．6281(2007)02．0153—05 免疫介导豚鼠脊髓运动神经元损伤的超微结构 及钙稳衡改变 李春岩，郭艳苏，田新英，刘亚玲，许 蕾，杨 程，吴东霞，吴淑玉 (河北医科大学第二医院神经内科，河北石家庄050000) 摘 要：应用常规透射电镜及草酸盐一焦亚锑酸盐技术原位固定细胞内钙，对豚鼠脊髓前角细胞内的钙分布进行 超微定位，探讨钙稳衡改变在免疫介导运动神经元损伤中的作用。结果发现模型组豚鼠脊髓前角运动神经元可见 粗面内质网扩张、线粒体肿胀、嵴排列紊乱等。神经元周围胶质细胞增生。在运动神经元扩张的粗面内质网池和 线粒体内室可见数量不等颗粒状电子致密的钙沉积物。线粒体内室内钙沉积颗粒与线粒体肿胀的程度相关。星 形胶质细胞内肿胀的线粒体内室及扩张的粗面内质网池内也可见电子致密钙沉积颗粒。因此认为，钙稳衡失调参 与了免疫介导的运动神经元损伤过程。 关键词：钙；超微结构；运动神经元损伤；豚鼠 文献标识码：A 中图分类号：R744．8；R361+．3；Q336 1ateral 900 肌萎缩侧索硬化(amyotrophicsclerosis， g)(北京维通利华实验动物技术有限公司)，以 新鲜牛脊髓前角匀浆0．18 ALs)是一种致死性神经系统变性疾病，以选择性 g一0．24g(湿重)与0．5 上、下运动神经元变性、丢失为特征。．目前缺乏有效 IIll磷酸盐缓冲液、0．5Illl弗氏佐剂制成油包水乳 的治疗方法。ALS发病机制研究主要集中在以下几 剂，于豚鼠背部皮下／皮内分5个～6个点进行接种。 个方面¨’21：(1)cu／zns0D1基因突变；(2)自身免疫每隔4周免疫一次，共免疫4次。除第一次免疫用 机制；(3)谷氨酸的兴奋毒作用；(4)钙超载；(5)氧化完全弗氏佐剂外，以后3次均为不完全弗氏佐剂。10 应激；(6)细胞骨架异常等。各个病因假说间并非独 只对照组豚鼠去除免疫原单纯以佐剂和磷酸盐缓冲 立，也并不相互排斥，一个因素的异常可导致另一因 液制成油包水乳剂以同样方法接种。模型组于出现 素的改变，最终加重和促进损伤的进一步发展。无 症状晚期(不能自行翻身)取材，对照组同时取材。 论哪个因素启动了运动神经元损伤过程，钙稳衡异 1．3常规透射电镜标本制作 常可能是导致细胞损伤的最终共同通路。 速眠新注射液(0．2rIll／kg)麻醉动物后，经左心 本文旨在建立免疫介导的运动神经元损伤模型 室至主动脉插管快速灌注磷酸缓冲液100rnl；4％多 基础上，利用草酸盐一焦亚锑酸盐技术原位固定细 聚甲醛一0．05％戊二醛混合液300Ⅱd～500IIll先快后 胞内钙，对脊髓前角细胞内的钙分布进行超微定位， 慢灌流固定；准确切取脊髓颈、腰膨大前角4％戊二 醛浸泡固定24 h； 并研究其与形态学变化之间的关系，探讨钙稳衡改 h；1％四氧化锇酸(Os04)后固定1 变在免疫介导的运动神经元损伤中的作用。 系列丙酮脱水、环氧树脂浸透、包埋，行1弘m半薄切