绿茶多糖的扫描电镜制样新方法及原子力显微镜观察 polysaccharides distilled from green tea and the observation of ultrafine structure of them with atomic force microscope.pdfVIP

第28卷第2期 电子显微学报 V01．28．No．2 2009年4月 Electron JournalofChinese Society 2009．04 Microscopy 文章编号：1000．6281(2009)02．0162—06 绿茶多糖的扫描电镜制样新方法及原子力显微镜观察 秦利鸿1，曹建波1，易伟松2’ (华中农业大学1．电镜平台，2．理学院，湖北武汉430070) 摘要：利用扫描电镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)对绿茶多糖及酶解绿茶多糖试样进行显微成像，得到颗粒状 或由单个颗粒聚集成的形貌结构。结果表明：改进制样方法的扫描电镜观察结果与原子力显微镜成像基本一致。 说明了改进后的扫描电镜制样方法是一种简单有效的方法。实验结果还在一定程度上解释了绿茶多糖经酶解后 其微观形态的变化情况。 关键词：绿茶多糖；扫描电镜；原子力显微镜 中图分类号：0631；TNl6；IT；115．21文献标识码：A 由于多糖相对分子量大、结构复杂、自身常存在 1．2方法 结构缺陷，无法得到良好的晶形¨q]。对于多糖样 1．2．1扫描电镜制样新方法 品，传统的扫描电镜制样方法是：取适量制备好的多 (1)用胶带解理1cm×1cm云母片，露出新鲜 糖溶液，真空冷冻干燥得粉末，用牙签将其粘在样品 的表面。 座上，再用洗耳球吹去浮样，喷金，进行扫描电镜观 (2)用移液枪分别取绿茶多糖溶液(4×10。3 察，所得到的形貌是片层状或碎屑状HJJ。 mg／mL)和酶解后绿茶多糖溶液(4×10’3mg／IIlL)滴 原子力显微镜的出现，使得对多糖这样的生物 一滴于云母片上，静置5min，滤纸吸去多余的液体， 1％锇酸熏蒸固定2 大分子表面形貌观察成为可能№柚]。与核磁共振、 h，喷金，SEM观察。 红外光谱、x射线衍射、色质联用等现代测试多糖结 1．2．2原子力显微镜制样方法 分别将绿茶多糖溶液(4×10。3 构技术相比，原子力显微镜可获得上述方法无法获 mg／mL)和酶解 得的直观信息。但原子力显微镜受限于局部区域的 后绿茶多糖溶液铺展在新解理云母片上，经氮气干 观察，多糖杂链庞大或修长，且有各种各样的形态， 燥的样品用原子力显微镜在Tapping模式下成像。 如枝链状、颗粒状、圈状等，所以需用扫描电镜先观 整个测试在室温下进行，湿度为45％～60％。扫描 察，对多糖试样的整体性加以了解。为了使多糖保 探针材料为SiN4，其微悬臂长235弘m，弹性参数98 持原貌，我们取绿茶多糖及酶解后稀溶液滴在新解 N／m。 理云母片上，静置5min后，用滤纸吸取多余的溶液， 2结果与分析 再用锇酸熏蒸固定，喷金，进行扫描电镜观察，得到 清晰的颗粒状或枝叶状及圆圈状等形貌，与文献 2．1粉末试样与云母片试样的效果对比 [10]报道一致，然后用原子力显微镜观察铺展在云 图1a、lb、lc分别是绿茶多糖粉末试样不同放 母片上的多糖及酶解后稀溶液，把所得结果与改进 大倍数的扫描电镜图像，实验结果表明：样品呈片状 制样方法的扫描电镜观察结果进行对比。 或碎屑状堆积，表面形貌光滑，即使提高放大倍率， 也是光滑表面，没有清晰细节，不能获