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生物化学--核酸化学.ppt
2.5 核酸的理化性质及其应用;2.5.1 核酸的一般性质 ①RNA为白色粉末，DNA是白色纤维状固体，二者均微溶于水，而不溶于一般有机溶剂中，故常用70%乙醇从水溶液中将核酸沉淀出来。 ②核酸既有碱性基团，又有磷酸基团，故为两性电解质，但酸性强。介质pH大于4时，呈阴离子，电泳时向阳极移动。 ③大多数DNA为线性分子，长度可达数厘米，直径仅为2nm，故DNA溶液粘度很高，分子极易断裂；RNA溶液粘度较小。 ;220;2.5.3 核酸的变性、复性; 2.5.3.1 核酸的变性（denaturation）;(2)结构和性质的变化： 化学键变化：氢键、疏水键断裂，不涉及共价键的断裂。 结构变化：改变核酸空间结构，一级结构不变。 增色效应：DNA变性后，溶液紫外吸收作用增强的效应。 原因：在双螺旋结构中，有序堆积的碱基紫外吸收降低，当DNA变性后，双链解开，碱基外露， 260nm紫外吸收增大，产生增色效??。;(3)变性的因素： 加热 极端的pH 有机试剂（甲醇、乙醇、尿素等）。; DNA的热变性; Tm值的影响因素：; Tm值的影响因素：;复性：在一定条件下，变性DNA单链间碱基重新配对恢复双螺旋结构，DNA的功能恢复。 减色效应：变性DNA复性过程中，伴有A260减小的现象。;影响复性的因素;温度和时间;DNA浓度 ;DNA顺序的复杂性 ;定义：不同来源的DNA单链间、单链DNA与RNA、RNA与RNA之间存在碱基配对区域，复性时形成杂交分子的现象。 ;;常用的杂交方法有: Southern（DNA)印迹法:利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。 Northern （RNA)印迹法: 将RNA固定在硝酸纤维素膜上后,用互补的,具有放射性标记的RNA或DNA探针与其杂交.;本章重点
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