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实验5 苔黑酚法测定酵母中RNA含量
实验五 苔黑酚法测定酵母中RNA的含量;一、目的 掌握用苔黑酚法测定RNA含量的原理和方法。;二、实验原理 核糖核酸与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变为糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(苔黑酚)反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250μ?g范围内,光吸收与RNA的浓度成正比。苔黑酚反应特异性较差,凡戊糖均有此反应,DNA和其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定RNA时可先测定DNA含量,再计算出RNA含量?。 ;三、实验器材 粗制RNA; 试管; 吸管; 分光光度计; 水浴锅。;四、实验试剂 标准RNA母液:准确称取RNA10.0mg ,用少量蒸馏水溶解(如不溶,可滴加浓氨水,调pH7.0),定溶至10.0ml,此溶液每ml含RNA1mg。 标准RNA溶液:称取母液1.0ml,置于10ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度。此溶液为100ug RNA/ml。 样品溶液:??一定量的RNA粗品用蒸馏水溶解并定溶,RNA 浓度在10~100ug/ml范围内。 苔黑酚试剂。;;样品的测定 取1.0ml样液置试管内,加蒸馏水1.0ml 及苔黑酚试剂2.0ml,沸水浴中保温45min,冷却,测定其A670nm。根据标准曲线求RNA的质量(ug)。
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