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吉玛公司提供的siRNA是双链的还是单链的？????? 吉玛公司的siRNA是双链的,而且也是按照双链来定价的。 吉玛公司RNA寡核苷酸使用什么纯化方法？ 吉玛公司运用国际上通用的HPLC纯化，如果特殊需要可以进行PAGE纯化。 合成RNA寡核苷酸的最大长度是多少？ 目前RNA寡核苷酸的最大长度是40碱基。 我们需要提供什么信息用于siRNA的合成？你们可以帮助免费设计吗？ 您需要准确地提供siRNA的19个核苷酸的靶序列和悬垂的合成物，或者您也可以提供相应地基因的GeneID或者Accession Number，由我们公司技术人员为您免费设计。 如何选择siRNA的悬垂组成？ 悬垂的序列组成是由顾客自行选择的。最近研究表明悬垂的组成在mRNA靶识别和酶解中不是很重要。悬垂可能在形成RISC的过程中起结构的作用。很多研究人员选择dTdT是因为研究表明脱氧核糖核苷能保护siRNA免受酶解。合成序列最重要的是确定靶mRNA的19个碱基的核心结构。 针对人体基因设计的siRNA对其他物种是否也有效？ 一般siRNA都具有物种特异性，很少与其他物种有相同的靶位点，所以针对人体基因设计的siRNA不会沉默其他物种的同源序列。然而，也有研究表明siRNA经过特异性设计后能对两个或两个以上的物种有效，这需要仔细进行siRNA设计和生物信息学分析。 你们提供的siRNA是怎样装运的？如果在常温下放置了一个星期，还有效吗？? 吉玛公司为您提供的siRNA是冻干粉包装的，在常温下运输。这些冻干的样品在室温下能稳定保存2－4个星期，所以放置一个星期不会影响其沉默效果。但我们建议您收到样品后最好保存于-20℃或-70℃有霜冷冻箱中。 在体外实验中，需要多少量的siRNA？ 我们建议您用于实验的siRNA的浓度为100nM。1nmol siRNA的量对于一个24孔板或是96孔板的实验已经足够了。 用100nM 的siRNA转染时只得到50%沉默效率，我可以把siRNA的浓度增加到200nM甚至400nM吗？ 增加siRNA的浓度一般不能改进沉默效率。高浓度的siRNA将可能导致去靶作用和对细胞的毒性。siRNA的高基因沉默效率来自于合理的设计，在100nM 甚至更低的浓度都可能有75%的沉默效率。另外，低的转染效率会导致低的沉默效率，建议您更进一步优化siRNA的导入条件。 定量RNA的公式是什么？ 研究者可以用Beer法则定量RNA：吸光度（260nm）=(摩尔消光系数)*(浓度)*(路径长度,cm)。为了便于理解，等式变为：浓度＝（吸光度,260nm）/[(摩尔消光系数)*(路径长度,cm)]。当使用一个标准的10mm比色皿时，在公式中路径长度这个变量等于1。 6uL浓度为10uM的siRNA溶解液中含有多少ug的siRNA？???????? 首先计算含有多少nmol的siRNA： a. 等式: ? nmol = (6 uL)(10 umol/L)； b. 单位换算: ? nmol = (6 uL)(10 umol/L)(1 L/1,000,000 uL)(1,000 nmol/umol)； c. 答案: ? nmol = 0.06 nmol。然后利用siRNA的平均分子量（13,300 g/mol）把nmol变为ug： a. 等式: ? ug = (0.06 nmol)(13,300 g/mol)； b. 单位换算: ? ug = (0.06nmol)(13,300 g/mol)(1mol/1,000,000,000 nmol)(1,000,000ug/g)； c. 答案: ? ug = 0.798≈0.8 ug。所以6uL浓度为10uM的siRNA溶解液中含有0.8ug的siRNA。 我需要浓度为20uM的样品，如何计算重悬siRNA缓冲液的量？ 样品浓度的计算如下：（siRNA的量，nmol）/（重悬体积，uL）＝样品浓度，umol/L。在解答前应先统一单位，确保单位可以抵消。例如：您购买了20nmol的siRNA，想溶解为50uM的样品。可按以下方法计算重悬缓冲液体积：a. 等式: (20 nmol)/ ? uL = 50 umol/L；b. 解答未知量: ? uL = (20 nmol)(1 L/50 umol)；c. 单位换算: ? uL = (20 nmol)(1 L/50 umol)(1 umol/1,000 nmol)(1,000,000 uL/1 L)；d.答案: ? uL = 400 uL。因此，应该使用400uL缓冲液去重悬20nmol的siRNA，溶解后为50uM的样品。 ? 一定需要阴性对照吗？ 是，阴性对照是RNA干扰实验中不可缺少的。由于在超过200 nM