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PCR扩增与细胞内DNA半保留复制有何异同
PCR扩增与细胞内DNA半保留复制有何异同 有关PCRPCR是高温解旋体内用的是DNA解旋酶 DNA复制是以自身为模板,边解旋,边复制,边折叠的。自身DNA复制有一个变构问题。PCR是一个一个核苷酸或脱氧核苷酸用酶接上去,再洗脱再接下一个的。形成的是单链,而且没有包裹的蛋白。 PCR 是一个体外过程,他们的酶不同,反应条件也不同,复制产物可以是双链,也可以是单链!! PCR是体外扩增DNA的过程~~所需温度较高,分三个阶段:高温解链,低温复性,中温合成,都在50度到95度之间.所需的酶不一样:PCR用耐热的TAQ酶.PCR扩增的是特定的序列~~位于两个引物之间的那一段DNA.另外,PCR可以复制DNApcr 全称聚合酶链式反应。其基本原理和生物复制一样,都要引物等。PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2~4分钟, 2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 也可复制RNA呢 单的说, PCR是将少量DNA在细胞外(首先要将DNA从细胞中取出)快速扩增的方法,能在数小时内将DNA扩增百万倍.样品的量即使非常少,也能被放大很多倍. DNA复制是在细胞内进行的.像细菌数小时DNA复制几次差不多了(复制时间同环境有关,比如有没有足够的养料). 既然学的就是这个专业,看看专业的涉及PCR的文章不就了解了,从概念上说PCR和生物自身的DNA复制的区别很简单,具体的细节就复杂了,PCR也不止一种 PCR技术???????????????????????????????????? DNA生物复制环境?? 体外复制, 加热,90摄氏度左右????? 体内,温和的环境模板?? DNA单链????????????????????? ?????? DNA单链原料?? 4种脱氧核糖核苷酸???????????????? 4种脱氧核糖核苷酸酶??? 主要是DNA聚合酶??????????????????? DNA解旋酶,DNA聚合酶, DNA连接酶等各种酶 引物?? 需要人工合成的引物????????????????? 自己合成引物成分步骤? 变性--退火--延伸??????????????????? 解旋-起始-延伸-结束原则?? 碱基互补配对原则?????????????????? 碱基互补配对原则 PCR是DNA的体外扩增技术.? DNA复制是有生命力的细胞在体内 自我复制的过程 ,属于体内扩增. PCR(聚合酶链式反应)原理 PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法,主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成: 即在高温(95℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成DNA新链。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍,PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增,经过25~30个循环后,理论上可使基因扩增109倍以上,实际上一般可达106~107倍。 DNA复制过程:?(一)复制的起始 ??? 1.螺旋的松弛与解链 ⑴拓扑异构酶---能改变DNA空间构像的酶 ??? 作用:DNA复制时松弛超螺旋,以利复制叉的行进及DNA合成,合成后再引向超螺旋。功能:不清楚,可催化体外拓扑异构化反应,拓扑异构酶分两型。
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