01长沙汉五亲子鉴定中心abi310操作手册序.docVIP

原理 PCR产物在加入ABI310仪器进行前先添加Hi-Di Formamide后并进行变性。ABI310是一种电泳毛细管系统，每一个样本都是单独在电场的作用下被上样到毛细管系统，通过电场DNA片段在毛细管系统迁移，当其经过毛细管上的玻璃窗时，通过仪器的激光激发标记在DNA片段上荧光标记，然后通过CCD进行收集。 样本 DNA扩增产物. 仪器和原辅材料 Equipment仪器 ABI310基因分析仪 冷冻箱(-20(C + 4(C) 移液枪 冷藏箱 PCR仪器 电脑 Materials原辅材料 ABI310收集软件 基因型标记 烧杯 黑色记号笔 10%的漂白剂 试剂杯 毛细管 50ml的大离心管 电极 酒精 胶塞 DETA 1ml玻璃注射器 4ml 玻璃杯 手套 离心管 Hi-Di Formamide 内标 无屑纸巾 实验室外套 胶带 离心管 离心管架 POP-4 移液枪头 护目镜 PUMP BLOCK 管塞 连管塞 纯水 0.2ml PCR管 0.2ml PCR管盖 0.2ml PCR管架 垃圾箱（一般垃圾，生物垃圾，刺穿垃圾） 质量控制 毛细管在使用300次后更换。 上样的时间不能少于1秒或者超过8秒。 所有的工作面在使用前使用10%的漂白剂擦拭。 ABI310基因分析仪在使用7天后必须进行清洗。 所有试剂每4天跟换一次。 PCR样本配制后最多使用7天。 确认所有的试剂在质量控制范围内的。 确认所有的仪器在质量控制范围内的。 所有分析室的物品不能在其他区域使用。 如果分析室的物品需要在其他房间使用前必须先用10%的漂白剂擦拭后才能使用。 所有大剂量的试剂在使用前分装，确认分装后的小包装上标记和原来的试剂是一致的。如果不同的批号的试剂不能分装到同一小包装内。 安全 在实验前仔细阅读MSDS。 如果皮肤和眼睛接触到Formamide，目前已知是有毒和致畸的。 手套，护目镜，和工作服在实验的时候必须一直穿着。 ABI310的加热部件可能会导致烫伤，在使用时一定小心。 按照垃圾归类管理规定对垃圾进行分类。 步骤 首先找出310工作表格。 重启电脑。 点击进入ABI Prism? 310 Collection Software。 ABI Prism? 310分析仪构造如下图所式。 温度设定 点击在视窗中的Manual Control，出现下拉菜单，选择Function pop-up menu。 选择温度设定菜单，设定温度为60℃，点击确认，这时需要关上ABI310的门。 Cleaning the Syringe清洗注射器 点击在视窗中的Manual Control，出现下拉菜单，选择Function pop-up menu，选择Syringe Home，点击确认。 将注射器推杆搬到左边，直到注射器可以取出的位置。 将注射器从pump block上取下。 使用纯水对注射器进行清洗，包括内部和外部。 使用无屑纸巾将注射器擦干。 清洗pump block 首先将毛细管从ABI310的胶塞中取出。 注意: 如果毛细管还在使用期限内，而在这一个月中将不会再次使用(不得超过300次或者一个月的时间),毛细管将取下然后存放 , 将注射器中装入纯水，选择点击“Seq Fill Capillary ”将POP4从毛细管中洗出，然后取出毛细管，将其放入装满纯水的容器中，至少要保证，毛细管的两端都浸润到水中。 使用双手将pump block小心的从仪器上取下。 使用纯水仔细的冲洗表面，所有的通道和胶塞。 将block和胶塞擦干后，装好。 将pump block小心的从新安装到仪器上。 安装新的毛细管 将新的毛细管小心的从包装中取出（仪器所使用的毛细管规格为：Lt= 47cm, Ld= 36cm, i.d. = 50μm），然后使用酒精将样本激发窗位置擦拭干净。 将加热板的门和激光窗口的门打开。 将pump block左侧的胶塞旋松。 将毛细管小心的插入胶塞中。 小心的调节毛细管，使得毛细管左侧与上胶通道成一水平线。 调节使毛细管激光窗的位置在仪器的激光发射口。 关上激光发射口的门。 毛细管的另一段的位置比电极长出0.55mm。 将毛细管用胶带固定在加热板上。 关闭加热板门。 自动校准 每次装新的毛细管后需要在点击Instrument menu 菜单下的instrument menu，对毛细管的位置进行重新的设定。 注意:.每当毛细管或电极改变时都需要再次自动校准。 点击Instrument menu下拉菜单中的Autosampler Calibration。 点击开始，按照提示完成所有的步骤。 配制新的试剂 将1.3ml的10X Genetic Analyzer EDTA Buffer加入到11.7ml的纯水中。 将一个4ml的玻璃瓶上标记为1